慢病毒介导RNA干扰沉默Fas基因在脐带间充质干细胞中的表达
王露1
翟玮玮1
杨向荣1
王芳1
李见2
张强3
李玉云4
1.蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心,安徽 蚌埠,2330302.徐州市第四人民医院检验科,江苏 徐州,2210093.蚌埠医学院第一附属医院检验科,安徽 蚌埠,2330304.蚌埠医学院临床检验诊断学教研室,安徽 蚌埠,233030
摘要：目的 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)株,为下一步使用低表达Fas基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础.方法 以人Fas基因mRNA序列作为干扰靶点,设计4组靶向Fas的shRNA序列,合成寡核苷酸,与经过BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接获得重组慢病毒,通过感染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.体外培养人UC-MSCs,使用包装好的慢病毒感染UC-MSCs,应用Real time-PCR和Western blotting检测感染后细胞中Fas mRNA及蛋白的表达情况.结果 经酶切以及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,病毒悬液滴度为3×l08 TU/ml.Real time-PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas表达水平较对照组显著降低.结论 慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达.
关键词：慢病毒siRNAFas脐带间充质干细胞
资助基金：安徽省教育厅自然科学研究项目(Kj2012A198)蚌埠医学院研究生科研创新计划(Byycx1317)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1475-1480 )
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