miR-144负性调节大鼠巨噬细胞TOLL样受体2的表达
王璇
蓝茜
刘莉
伊静
李靖
李玥
王美晨
李嘉熙
宋刘梅
李冬民
1.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100612.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100613.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100614.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100615.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100616.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100617.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100618.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 7100619.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 71006110.西安交通大学 医学部基础医学院生物化学与分子生物学系，陕西 西安 710061; 西安交通大学 环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西 西安 710061
摘要：目的：明确TOLL样受体2（TLR2）与microRNA144（miR-144）作用之间的关系。方法利用不同浓度的miR-144的模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitor）瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞，RT-qPCR检测miR-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏cDNA为模板，PCR获取目的片段（即含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区）；用SacⅠ、XbaⅠ双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区，构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因，并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒，即pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR；并用miR-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确miR-144与TLR2 mRNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L miR-144 mimics后，NR8383细胞中miR-144表达显著升高，而TLR2及其下游分子TNF-α表达显著下降；而100 nmol/L miR-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功；用100 nmol/L miR-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后，pmir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论 miR-144通过靶向结合TLR2 mRNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。
关键词：miR-144TOLL样受体2NR8383细胞巨噬细胞pmirGLO报告基因载体
资助基金：国家自然科学基金(81370952)国家级大学生创新训练项目(201310698055)陕西省科技计划项目(2013K21-22-03)西安交通大学本科生科研训练和实践创新基金项目(2013273及2014X15003)Supported by National Natural Science Foundation of China (81370952)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 319-325 )
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