应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞系
马文霞1
贺莉2
刘椿1
张庆玲3
丁彦青3
1.南方医科大学病理系//广东省分子肿瘤病理学重点实验室,广东 广州,5105152.中国人民解放军264医院,山西 太原,0300003.南方医科大学病理系//广东省分子肿瘤病理学重点实验室,广东 广州 510515;南方医科大学南方医院,广东广州 510515
摘要：目的 构建WTX CDS区全长重组慢病毒表达载体,感染结直肠癌SW620细胞,建立WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞株.方法 将WTX基因全长CDS区插入GV287慢病毒质粒载体,重组载体与包装载体共转染人胚肾293T细胞,收集上清、浓缩得到表达WTX的重组慢病毒.慢病毒感染结直肠癌SW620细胞,荧光显微镜初步观察感染效率,G418进一步筛选得到稳定感染细胞株.QPCR及Western blotting检测WTX过表达效率.每部分均设立相应对照.结果 载体片段测序结果示成功构建了WTX重组表达载体;包装病毒滴度检测适中,提示WTX表达慢病毒包装成功;慢病毒感染结直肠癌SW620细胞后, WTX基因mRNA以及蛋白表达水平明显增高,有统计学意义,提示SW620结直肠癌细胞WTX高表达稳定株构建成功.结论建立慢病毒感染方法的结直肠癌SW620细胞WTX过表达稳定细胞株,为进一步研究WTX对结直肠癌发生、发展的作用机制提供分子生物学工具.
关键词：Wilm’stumoronXchromosome慢病毒载体稳定转染结直肠癌
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1122-1127 )
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