99Tcm标记反义miR208b寡核苷酸及其转染离体肥大心肌细胞的实验研究
王静
冯会娟
欧阳伟
孙云钢
吴菊清
陈盼
1.南方医科大学珠江医院核医学科,广东 广州,5102822.南方医科大学珠江医院核医学科,广东 广州,5102823.南方医科大学珠江医院核医学科,广东 广州,5102824.南方医科大学珠江医院核医学科,广东 广州,5102825.南方医科大学珠江医院核医学科,广东 广州,5102826.南方医科大学珠江医院核医学科,广东 广州,510282
摘要：目的：探索用放射性核素99Tcm标记反义miR208b寡核苷酸，并转染离体早期肥大心肌细胞的实验过程及方法。方法合成针对miR208b的反义miR寡核苷酸（AMO），LNA（带锁核酸）修饰AMO，将双功能螯合剂NHS-MAG3（N-羟基琥珀酰亚胺-巯基乙酰基三甘氨酸）与LNA-AMO偶联后，用99Tcm标记，然后用Sep-Pak C18反相层析法对NHS-MAG3-LNA-AMO及其标记物进行洗脱纯化，前者同时经Gene Quant DNA/RNA calculator测定在260 nm波长处的吸光度；不同检测方法测定纯化后标记物的标记率、放化纯度、稳定性以及与靶基因杂交的活性；建立由血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的离体心肌肥大细胞模型，检验早期肥大心肌细胞内miRNA208b的相对表达量以及经脂质体包裹的99Tcm-NHS-MAG3-LNA-AMO在早期肥大心肌细胞内的滞留率。结果纯化后的标记物标记率>84%，放化纯度>86%，标记物分别在新鲜人血清、生理盐水中孵育12 h后，放化纯度均大于80%，并具有与靶向基因杂合的能力。离体心肌肥大模型成功建立，测得早期心肌肥大细胞内miRNA208b表达升高，且最终标记物转染细胞后6 h滞留率大于20%。结论在双功能螯合剂NHS-MAG3以及LNA的介导下，成功将放射性核素99Tcm标记于NHS-MAG3-LNA-AMO，最后将反义探针顺利转染早期离体肥大心肌细胞，这为后续的在体心肌肥大核素显像提供重要实验基础。
关键词：miRNA208b99Tcm反义miR寡核苷酸(AMO)NHS-MAG3心肌肥大脂质体
资助基金：广东省科技计划(2012B031800125)广东省自然科学基金(10151051501000036)广州市海珠区科技计划(048101040005589)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1316-1319 )
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