人Bcl-6 3'UTR区报告质粒及其表达载体的构建和功能检测
韩白玉1
崔瀚之2
燕翔3
黄鹏4
黄华龙4
范忠义3
窦京涛5
1.解放军总医院内分泌科,北京100853;北京军区第264医院内分泌科,山西太原0300002.解放军309医院肿瘤科,北京,1000913.解放军总医院肿瘤科,北京,1008534.解放军61213部队,山西临汾,0410005.解放军总医院内分泌科,北京,100853
摘要：目的 通过构建bcl-6基因野生型、突变体3'UTR区及其编码序列(CDS),观察miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用及bcl-6表达载体回复miR-127抑制细胞周期和细胞生长的功能.方法 利用PCR方法扩增bcl-6基因3'UTR区序列及其CDS,分别构建在pcDNA3.0-Luc和pcDNA3.0-Flag载体上,在bcl-6基因3'UTR质粒基础上应用重组PCR方法构建miR-127结合位点突变的突变体报告基因质粒,应用荧光素酶报告基因系统检测miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用,在肝癌细胞HepG2中检测过表达及敲低miR-127引起bcl-6基因表达抑制后细胞周期和细胞生长的改变,同时应用表达载体回复bcl-6蛋白水平,检测bcl-6在miR-127调控细胞周期和细胞生长中的必要性.结果 构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确,bcl-6 YUTR野生型和突变体报告质粒与miR-127共转293T细胞和HepG2细胞后荧光素酶报告基因检测显示miR-127明显降低野生型报告质粒的活性,但对突变体活性没有影响,miR-127可引起HepG2细胞G2/M期阻滞并抑制细胞生长,bcl-6可以逆转miR-127对细胞周期和细胞生长的影响.结论 成功构建bcl-6基因3'UTR区野生型、突变体报告质粒和bcl-6基因的表达载体,荧光素酶报告基因和回复实验证实均具有生物学功能.
关键词：bcl-6基因3’UTR区荧光素酶报告基因细胞周期
资助基金：中国人民解放军第三○九医院项目(2015MS-010)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1451-1456 )
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