人CD45基因克隆及其在Hela细胞中的表达
李捷
许天昱
吴璐琳
张丽芸
卢晓
左大明
陈政良
1.南方医科大学基础医学院免疫学教研室,广东广州,5105152.南方医科大学基础医学院免疫学教研室,广东广州,5105153.南方医科大学基础医学院免疫学教研室,广东广州,5105154.南方医科大学基础医学院免疫学教研室,广东广州,5105155.南方医科大学基础医学院免疫学教研室,广东广州,5105156.南方医科大学基础医学院免疫学教研室,广东广州,5105157.南方医科大学基础医学院免疫学教研室,广东广州,510515
摘要：目的 克隆人CD45cDNA并导入Hela细胞中表达,建立研究CD45功能的细胞模型.方法 采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增CD45基因PTPRC的cDNA,将其克隆至pMD-18T载体.构建重组真核表达载体PcDNA3.1-3xflag-CD45,经HindⅢ和XhoⅠ双酶切及测序验证.将其转染至Hela细胞,以流式细胞术(FCM)和免疫印迹(WB)分析CD45在Hela细胞中的表达情况,碱性磷酸酶试剂盒检测CD45的活性.结果 分离到长约3900bp的人PTPRCcDNA片段,将其插入pMD-18T载体获得了cDNA克隆.酶切和测序结果证实重组表达载体PcDNA3.l-3xflag-CD45构建成功,FCM和WB分析表明CD45能在Hela细胞中有效表达,且表达的重组CD45蛋白具有生物学活性.结论 成功获得人PTPRCcDNA克隆并在Hela细胞中有效表达,为进一步研究CD45功能奠定了基础.
关键词：CD45基因克隆真核表达Hela细胞
资助基金：国家自然科学基金(30972679)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1575-1578,1585 )
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