SA/hI-TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定
许晓玲1
柳英2
陈青阁1
黄通亮1
高基民1
1.温州医科大学//浙江省模式生物技术与应用重点实验室,浙江 温州,3250352.烟台龙矿中心医院,山东 烟台,265700
摘要：目的：制备链亲和素连接的人干扰素诱导T细胞α趋化因子融合蛋白（SA/hI-TAC），并对其生物学功能进行鉴定。方法构建pET24a-SA-hI-TAC/pET21a-hI-TAC-SA表达载体，在大肠杆菌BL21中诱导表达两种融合蛋白，用镍金属螯合层析纯化、透析复性及蛋白质印迹法（Western blot）鉴定，融合蛋白中I-TAC部分的生物学活性由淋巴细胞趋化实验检测；融合蛋白中SA的生物学活性由流式细胞仪测定。结果两种融合蛋白可在大肠杆菌BL21中被诱导表达，分别占细菌表达总蛋白量的12%和25%，经镍柱纯化后融合蛋白纯度达85%、90%，经丙烯葡聚糖凝胶S-100过滤层析后，纯度均可达到98%，融合蛋白在生物素化的MB49细胞（小鼠膀胱癌细胞）表面的修饰效率分别为91.3%、98.8%，并对淋巴细胞的趋化作用呈剂量依赖性，且hI-TAC-SA的趋化作用明显强于SA-hI-TAC。结论 SA/hI-TAC双功能融合蛋白可能应用于肿瘤局部治疗以及肿瘤疫苗。
关键词：人干扰素诱导T细胞α趋化因子链亲和素融合蛋白表面修饰
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1715-1720 )
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