人细胞表面黏附分子P选择素启动子报告基因的构建及鉴定
徐若霆
周辉
刘玮璐
吴炜
刘鲜艳
张文强
谭洁
赵明
1.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105152.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105153.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105154.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105155.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105156.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105157.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105158.南方医科大学病理生理学教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,510515
摘要：目的：构建人细胞表面黏附分子P选择素（p-selectin）基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter，检测其转录活性，并应用于筛选药物对其转录活性的影响。方法根据UCSC软件查找的人基因组DNA的p-selectin启动子序列并设计两端引物，扩增人基因组DNA中的p-selectin启动子。用限制性内切酶KpnⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGL3-Basic和p-selectin启动子后，将p-selectin基因启动子插入到pGL3-basic报告基因载体上。重组质粒命名为pGL3-pselectin-promoter。将其与内参质粒pRL-SV40瞬时共转染293F细胞，检测双荧光素酶活性。对不同启动子片段长度的p-selectin报告基因进行双荧光素酶的检测。以炎症因子和药物分组刺激转染了报告基因质粒的293F细胞并检测双荧光素酶活性。结果成功构建p-selectin基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter，质粒酶切及测序结果完全正确。瞬时共转染pGL3-pselectin-promoter/pRL-SV40组荧光素酶活性为0.8573±0.4703，高于转染pGL3-Basic/pRL-SV40组的荧光素酶活性值0.03955±0.05894。pGL3-1826 bp相比较于pGL3-1092 bp组和pGL3-3738 bp组具有最强的转录活性。炎症因子LPS和TNF-α和药物As2O3均具有上调pGL3-pselectin-promoter转录活性的作用。结论 pGL3-pselectin-promoter在293F细胞中能被转录激活，并验证了炎症因子对其转录表达的作用，并为药物筛选与评价提供解决方案。
关键词：细胞黏附分子类P选择素炎症反应荧光素酶
资助基金：国家自然科学基金(81272095)大学生创新创业训练计划项目(201512121268)Supported by National Natural Science Foundation of China (81272095)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 332-338 )
英文信息