血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响
覃乙芯
吴卓敏
徐茜
廖文婕
贺帅
岑柏宏
廖路敏
王震
季爱民
1.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102822.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102823.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102824.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102825.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102826.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102827.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102828.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,5102829.南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州,510282
摘要：目的：探讨人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）的最佳饥饿条件，以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法，并为HUVECs相关实验提供研究基础。方法用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注脐静脉腔消化15 min，收集细胞并用内皮细胞专用培养基（含5%内皮细胞基础培养基、1%内皮细胞生长因子、1%青链霉素），置37℃，5%CO2培养箱培养。在倒置显微镜下观察细胞形态特点，并用细胞免疫荧光方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术检测所得HUVECs的纯度，并检测0%、0.1%、0.5%、1%血清浓度的培养基饥饿处理0、6、12、18、24 h对细胞周期的影响。结果0.1%Ⅱ型胶原酶消化可以得到HUVECs，细胞培养呈典型的铺卵石状排列，细胞较密处呈涡旋状排列。免疫荧光检测细胞VIII因子相关抗原表达呈阳性。流式检测细胞纯度高达99.67%。不同血清浓度培养基培养6 h可获得70%左右的G0/G1期细胞；培养12 h可获得80%~90%的G0/G1期细胞；培养18、24 h可获得95%左右的G0/G1期细胞。结论0.1%Ⅱ型胶原酶充盈静脉管腔可以获得高纯度的原代HUVECs。完全无血清培养基培养12 h即可获得纯度超过80%的G0/G1期HUVECs。
关键词：人脐静脉内皮细胞细胞原代培养血清饥饿细胞周期
资助基金：国家自然科学基金(81370449)广州市科技计划项目产学研协同创新重大专项(201504291720212)Supported by National Natural Science Foundation of China (81370449)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1140-1143 )
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