利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7细胞株
王成博
康巧珍
丁聪
李雅雯
梁桃桃
张成龙
王文
王婷
1.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,4500002.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,4500003.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,4500004.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,4500005.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,4500006.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,4500007.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,4500008.郑州大学生命科学学院,河南 郑州,450000
摘要：目的 利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7巨噬细胞株,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能奠定基础.方法 根据CRISPR/Cas9靶向原理设计并合成3个特异性识别4.1R基因的向导RNA(sgRNA),构建sgRNA-lentiCRISPRv2重组质粒并转入293T细胞中制备sgRNA-Cas9慢病毒,慢病毒侵染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞并稀释至单克隆,Western blotting印记检测单克隆细胞中蛋白4.1R的表达,测序确认单克隆细胞中突变位点.结果 Western blotting印迹检测结果表明筛选出的1株单克隆细胞中蛋白4.1R的表达完全缺失;测序结果表明该细胞株中4.1R基因发生了19bp的缺失突变;并且4.1R基因敲除后,RAW264.7细胞的增殖能力显著增加.结论 本研究利用CRISPR/Cas9系统成功的干扰了巨噬细胞系RAW264.7细胞中4.1R的表达,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能提供了有效工具.
关键词：CRISPR/Cas9系统4.1R基因敲除RAW264.7细胞
资助基金：国家自然科学基金(81602537)国家自然科学基金(81373119)河南省高等学校重点科研项目计划(17A180014)Supported by National Natural Science Foundation of China(81602537)Supported by National Natural Science Foundation of China( 81373119)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1609-1614 )
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