核外P53介导的自噬抑制在热打击诱导内皮细胞损伤中的作用
邹志敏1
古正涛2
李莉2
赵明3
苏磊4
1.南方医科大学,广东 广州 510515;南方医科大学病理生理教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州 510515;广州军区广州总医院重症医学科//全军热区创伤救治与组织修复重点实验室,广东 广州 5100102.南方医科大学第三附属医院急危重症医学部,广东 广州 510630;南方医科大学病理生理教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州 5105153.南方医科大学病理生理教研室//广东省医学休克微循环重点实验室,广东 广州,5105154.南方医科大学,广东 广州 510515;广州军区广州总医院重症医学科//全军热区创伤救治与组织修复重点实验室,广东 广州 510010
摘要：目的 观察热打击主动脉内皮细胞(MAEC)后核外p53与细胞自噬和细胞凋亡之间的关系,阐明热打击后细胞死亡模式及其分子机制.方法 体外原代分离培养小鼠主动脉内皮原代细胞(MAEC),建立小鼠主动脉内皮细胞热打击模型,对照组将细胞置于标准37℃、5%CO2细胞培养箱,热打击组将细胞置于43℃细胞培养箱中进行热打击2 h,热打击后继续在细胞培养箱进行复温(0、1、3、6、9 h),并分别使用自噬抑制剂3-MA(5 mmol/L),自噬诱导剂rapamycin(20μmol/L),p53抑制剂PFT(10μmol/L)预处理细胞1 h,处理后的细胞通过CCK8法检测细胞活力以及Annexin V-FITC/PI双染色方法检测细胞凋亡率,JC-1染色流式观察细胞线粒体膜电位改变,细胞免疫荧光染色及Western blotting观察p53亚细胞定位和LC3-Ⅱ蛋白表达.结果 与对照组(37℃)比较,热打击后(43℃)MAEC细胞活力显著下降(P<0.05);热打击后复温6 h线粒体膜电位明显下降,同时细胞凋亡率显著增高(P<0.05);热打击后随着复温时间(0 h、6 h)延长,胞浆p53表达逐渐减弱,而线粒体p53表达逐渐增强;自噬抑制剂3-MA可进一步诱导细胞线粒体膜电位下降,并显著增高细胞凋亡率,而自噬诱导剂rapamycin可逆转上述损伤作用(P<0.05).p53抑制剂PFT明显促进了自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达,同时也明显抑制了热打击诱导的细胞线粒体膜电位降低和细胞凋亡(P<0.05).结论 热打击诱导MAEC细胞线粒体损伤及细胞凋亡,其机制与核外p53线粒体移位继而介导细胞自噬抑制有关.
关键词：热打击核外p53自噬抑制线粒体损伤细胞凋亡
资助基金：国家自然科学基金(81501690)广东省自然科学基金(2015A030310084)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 787-793 )
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