Gata4基因H435Y突变型小鼠模型的建立及验证
张慧
陈名武
方涛
张甜
倪文泉
1.安徽医科大学附属省立医院儿科,安徽 合肥,2300012.安徽医科大学附属省立医院儿科,安徽 合肥,2300013.安徽医科大学附属省立医院儿科,安徽 合肥,2300014.安徽医科大学附属省立医院儿科,安徽 合肥,2300015.安徽医科大学附属省立医院儿科,安徽 合肥,230001
摘要：目的 选择野生型C57BL/6J小鼠为研究模型,利用CRISPR/Cas9技术建立Gata4基因H435Y突变型小鼠.方法 针对Gata4基因的基因序列信息设计针对Gata4基因H435Y位点的单链向导RNA(single-guideRNA,sgRNA),经活性检测后,将具有活性的sgRNA和Cas9体外转录成RNA,通过显微注射将sgRNA、Cas9 mRNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到小鼠受精卵中,通过PCR和基因测序方法对Gata4基因突变进行检测及鉴定,培育Gata4基因突变小鼠并分析后代的突变情况.结果 顺利构建sgRNA载体并体外转录,成功sgRNA、Cas9 mRNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到受精卵中.基因测序鉴定获得4只F0代初建鼠.选取阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠杂交,得到F1代鼠,再相互交配获得F2代鼠.PCR显示F2代鼠Gata4基因H435Y突变,成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠模型并传代繁育.结论 通过CRISPR/Cas9技术可以成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠动物模型.
关键词：Gata4CRISPR/Cas9sgRNA动物模型先天性心脏病
资助基金：安徽省科学基金(1608085MH196)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1245-1249 )
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