丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬
戴旭芳1
闫小晶2
谢鹏2
连继勤2
1.庆师范大学重庆市特殊儿童心理诊断与教育技术重点实验室,重庆400047;重庆师范大学教育科学学院特殊教育系,重庆4000472.陆军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,重庆,400038
摘要：目的 探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响.方法 人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10％胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4B mRNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自噬水平变化.结果 VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平(P<0.05).VPA处理不影响SH-SY5Y细胞中ATG4B的启动子活性(P>0.05),但显著下调其mRNA的稳定性(P<0.05).同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p的表达水平(P<0.05).使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的下调作用.VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平(P<0.05).结论 VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬.
关键词：丙戊酸钠SH-SY5Y细胞ATG4BmiR-34c-5p自噬
资助基金：国家自然科学基金(31201068)实验室重点项目(201711000251)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1415-1420 )
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