沉默RRM1可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性
田楠楠
周磊
杨丹妮
吴焕贤
马韵词
吕琳
吴少瑜
1.南方医科大学药学院,广东 广州,5105152.南方医科大学药学院,广东 广州,5105153.南方医科大学药学院,广东 广州,5105154.南方医科大学药学院,广东 广州,5105155.南方医科大学药学院,广东 广州,5105156.南方医科大学药学院,广东 广州,5105157.南方医科大学药学院,广东 广州,510515
摘要：目的 阐明沉默核苷酸还原酶M1亚基(RRM1)对乳腺癌耐药细胞MCF-7/R逆转耐药的作用.方法 通过高浓度紫杉醇诱导耐药株MCF-7/R;运用Kaplan-Meier Plotter绘制RRM1基因的生存曲线;通过siRNA沉默MCF-7/R细胞中RRM1基因表达,并用Western blot和qRT-PCR方法检测蛋白和基因水平的表达,筛选出高效特异的si-RRM1序列;将该si-RRM1序列转染MCF-7/R细胞,筛选得到能稳定抑制RRM1基因表达的细胞株MCF-7/R/siRNA;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测RRM1沉默后MCF-7/R细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,并观察周期、凋亡相关蛋白的变化;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默RRM1后给予紫杉醇治疗对裸鼠体内抑瘤效果的影响.结果 生存曲线分析显示RRM1基因表达与乳腺癌患者的生存率呈负相关(P=0.000);MCF-7/R细胞中证实RRM1蛋白和mRNA表达水平较MCF-7细胞均显著升高(P<0.01);si-RRM1序列筛选中,转染si-RRM1-04组细胞的RRM1蛋白和mRNA表达量降低最为显著(P<0.001);沉默RRM1后,MCF-7/R细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,细胞晚期凋亡比例明显升高(P<0.001),同时降低Akt蛋白的磷酸化并抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进p53蛋白表达水平的增加(P<0.001);裸鼠实验显示,与si-NC组相比,沉默RRM1后给予紫杉醇治疗可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长(P<0.001).结论 沉默RRM1可通过诱导细胞凋亡增加提高MCF-7/R细胞化疗敏感性,逆转乳腺癌紫杉醇化疗耐药.
关键词：核苷酸还原酶M1亚基乳腺癌siRNA紫杉醇MCF-7耐药
资助基金：国家自然科学基金(81473246)广东省科技计划(C1040924)广东省医学科学技术研究项目(A2018189)广东省自然科学基金(2018A030313405)
论文发表日期：2019-03-02
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 304-312 )
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