在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂
马洁雪1
吴乐乐1
丁向真2
李志英2
王盛2
1.西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室,宁夏 银川,7500212.西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室,宁夏 银川750021;宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室,宁夏 银川750021
摘要：目的 探索在植物中瞬时高效表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的可行性,探寻低成本rhPA表达新途径.方法 构建表达rhPA的烟草花叶病毒(TMV)表达载体pTMV rhPA-NSK和Zera融合标签植物表达载体pJ Zera-rhPA;农杆菌渗滤接种受体植物Nicotiana benthamiana和N.excelsiana叶片;观察叶片接种部位表型变化;Western blot和ELISA测定和分析rhPA在受体烟草中的表达情况及表达产物特点;纤维蛋白琼脂糖平板法评价rhPA的体外生物活性.结果 病毒载体实验结果显示,pTMV rhPA-NSK病毒载体在N.benthamiana和N.excelsiana叶片接种部位产生不同程度的坏死症状;在坏死组织中依然存在完整的rhPA蛋白;N.benthamiana中rhPA的表达量略高于N.excelsiana(P<0.05),约占接种叶片可溶性总蛋白的0.6％;表达的rhPA具有体外溶栓活性.Zera融合标签实验结果显示,pJ Zera-rhPA表达载体在烟草叶片接种部位未造成坏死;Zera标签与其融合蛋白rhPA之间可能存在着易断裂位点;Zera标签蛋白微粒的形成是一种逐步积累聚集的过程;在微粒形成过程中,部分可溶性多肽可能被包裹进了微粒.结论 在烟草中可以快速地表达具有生物学活性的rhPA,植物病毒表达系统为低成本rhPA的生产提供一种富有潜力的新平台.
关键词：烟草花叶病毒Zera标签重组人纤溶酶原激活剂表达烟草
资助基金：国家自然科学基金(31160032)国家自然科学基金(31660037)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 515-522 )
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