采用CRISPR/Cas9技术构建新品系HBeAg转基因小鼠
郭睿1
田怡1
金雪媛1
陈海燕2
王贵虎2
黄小钟1
李步荣3
李宗芳2
杨军1
1.西安交通大学第二附属医院 病理科,陕西 西安,7100042.西安交通大学第二附属医院 生物诊断治疗国家地方联合工程研究中心,陕西 西安,7100043.西安交通大学第二附属医院 检验科,陕西 西安,710004
摘要：目的 培育一种HBeAg转基因小鼠新品系.方法 克隆乙型肝炎病毒HBeAg基因;采用CRISPR/Cas9技术,通过同源重组的方式分别在Rosa26基因位点定点插入pliver-HBeAg表达框,获得含有HBeAg基因的表达载体pliver-HBeAg,经酶切得到含有HBeAg基因的线性DNA片段,将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,再将其移植入C57BL/6J雌性代孕小鼠子宫,获得F0代建系小鼠;采用长片段PCR对出生小鼠进行鉴定,共获得HBeAg基因正确同源重组的F0代建系小鼠;F0代阳性小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配,繁育获得F1代小鼠,经PCR鉴定及测序确认阳性F1代小鼠;将携带HBeAg基因的F1代转基因小鼠再次回交,对子代小鼠进行PCR基因型鉴定,直至获得纯合子子代转基因小鼠;采用全自动化学发光免疫分析仪、胶体金法和免疫组织化学方法分别检测HBeAg转基因鼠血浆和肝组织中HBeAg和HBeAb的表达.结果 采用CRISPR/Cas9技术共获得56只F0代小鼠,其中2只为正确同源重组的F0代小鼠;F1代小鼠中6只阳性F1代小鼠.截至目前,共获得22只F2代纯合子和29只杂合子HBeAg转基因小鼠.所有HBeAg转基因小鼠外周血中均可检出高浓度的HBeAg蛋白,但未检出HBeAb的表达.而且免疫组化结果显示HBeAg转基因小鼠肝脏肝细胞中可特异性表达HBeAg蛋白.结论 采用CRISPR/Cas9技术成功构建了能在肝脏肝细胞中稳定表达HBeAg蛋白且对HBeAg免疫耐受的新品系HBeAg转基因小鼠,为HBV的研究提供了新的实验动物模型.
关键词：转基因小鼠乙肝病毒HBeAgCRISPR/Cas9C57BL/6J小鼠
资助基金：国家自然科学基金(NSFC30872403)新世纪优秀人才支持计划(NCET-10-0647)陕西省科技统筹创新工程计划(2011KTCL03-14)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1017-1022 )
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