Daxx过表达能显著抑制AngII诱导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移
曹玉梅1
孙四玉1
杨冬梅2
霍艳杰1
邱飞2
谢雪娇2
庹勤慧3
1.湖南中医药大学 药学院,湖南 长沙,4102082.湖南中医药大学 医学院,湖南 长沙,4102083.湖南中医药大学 药学院,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学 医学院,湖南 长沙 410208
摘要：目的 构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP,并探讨Daxx对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导VSMCs增殖的影响.方法基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP.经测序和酶切验证后,用重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP与包装辅助载体共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液纯化后感染VSMCs,Western blot法鉴定过表达Daxx的VSMCs株.然后将pCDH-EGFP病毒液感染的空载体细胞和pCDH-Daxx-EGFP病毒液的感染的过表达Daxx细胞都分成无血清培养基孵育组和AngⅡ孵育组.用MTT法检测细胞活性、流式细胞术观察细胞周期、划痕法检测细胞迁移、Western blot法检测细胞中p-Akt蛋白表达.结果基因测序与双酶切鉴定表明Daxx基因慢病毒表达载体构建成功;与Vector组比,转染Daxx组、蛋白表达水平明显增加(P<0.05);经AngII处理后,转染Daxx组细胞活性、S期细胞比率和与细胞迁移率与Vector组比较显著降低(P<0.05);转染Daxx组细胞中p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.05).结论成功构建了重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP和过表达Daxx的VSMCs株;Daxx能显著抑制AngII诱导的VSMCs增殖和迁移,其机制可能与p-Akt蛋白有关.
关键词：Daxx慢病毒载体血管平滑肌细胞增殖
资助基金：国家自然科学基金(81673722)国家自然科学基金(81603600)湖南省教育厅重点项目(16A156)湖南省自然科学基金(2019JJ50426)湖南中医药大学基础医学一流学科开放基金(2018JCYX04)研究生科研创新项目(2018CX54)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1173-1179 )
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