二甲双胍抑制大鼠胆管成纤维细胞胶原生成的分子信号机制
卢家美1
张晶晶1
吕毅2
王博2
贾丽娜2
师建华2
1.西安交通大学医学院第二附属医院肾病内科,陕西 西安 7100042.西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科,陕西 西安 710061
摘要：目的 探讨二甲双胍是否通过活化腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的大鼠胆管成纤维细胞胶原生成并揭示其分子信号机制.方法 取雌雄各半的SD大鼠共50只(体质量150～200 g),CO2窒息法处死后,无菌条件下分离并培养大鼠胆管成纤维细胞,倒置显微镜观察所培养的细胞,发现不同体质量及性别的大鼠所获取的细胞形态及活性无差异.采用随机数字表法进行随机分组,分别设置对照组、TGF-β1组、Smad3 siRNA干预组、结缔组织生长因子(CTGF)siRNA干预组、二甲双胍干预组、Compound C干预组,每组3个样本.设置对照组:大鼠胆管成纤维细胞正常培养;TGF-β1组:10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Smad3 siRNA干预组:Smad3 siRNA转染24 h后+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;CTGF siRNA干预组:CTGF siRNA转染24 h后+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;二甲双胍干预组:10 mmol/L二甲双胍+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Compound C干预组:10μmol/L Compound C+10 mmol/L二甲双胍+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞.以TGF-β1刺激大鼠胆管成纤维细胞分泌胶原,以Smad3 siRNA或CTGF siRNA转染细胞以抑制Smad3或CTGF蛋白的表达,以二甲双胍孵育细胞以激活AMPK,以Compound C预处理细胞以抑制AMPK的活性.采用ELISA或Western-blot的方法检测CTGF、胶原I(Col I)蛋白水平;Western-blot的方法检测p-Smad3/t-Smad3、p-AMPK/t-AMPK、CTGF水平.结果 TGF-β1以时间和剂量依赖的方式刺激胆管成纤维细胞胶原I生成,二甲双胍激活的AMPK也剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的胶原I生成;AMPK抑制剂Compound C预孵育细胞,可显著逆转二甲双胍激活的AMPK抑制胶原I生成的作用(P<0.01).进一步发现,二甲双胍激活的AMPK对TGF-β1刺激的Smad3磷酸化无抑制作用,却可抑制其下游的CTGF蛋白表达(P<0.01)及胶原I生成(P<0.01),而AMPK抑制剂可逆转二甲双胍对CTGF及胶原I的上述作用.结论 二甲双胍通过激活AMPK抑制TGF-β1/Smad3信号通路诱导的CTGF蛋白表达,进而抑制胆管成纤维细胞胶原I生成.
关键词：转化生长因子-β1腺苷酸激活蛋白激酶TGF-β1/Smad3信号通路胆管成纤维细胞胶原
资助基金：国家自然科学基金(81700605)国家自然科学基金(81100250)西安交通大学医学院第一附属医院院项目(2016MS-10)
论文发表日期：2020-05-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 640-646 )
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