弓形虫感染导致DC2.4细胞外泌体特征差异的研究
李东亮1
杨淑君2
彭鸿娟1
1.南方医科大学公共卫生学院病原生物学系,广东 广州 5105152.陆军第74集团军医院超声诊断科,广东 广州 510318
摘要：目的 分析小鼠树突状细胞(DC2.4)感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化,为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息.方法 DC2.4细胞分为2组(未感染组与感染组),用含无外泌体血清的培养基培养.待细胞长满,感染组用弓形虫RH株速殖子感染28 h,未感染组则培养28 h.收集两组细胞的培养上请,采用超速离心法分别提取外泌体,通过透射电镜检测外泌体形态,并用纳米颗粒追踪仪检测外泌体的粒径大小以及颗粒密度.对外泌体进行小RNA高通量测序分析,用生物信息学方法分析感染组与对照组差异显著的piRNA,对并其靶基因及功能进行预测.结果 对弓形虫感染与未感染的DC2.4细胞分泌的外泌体进行形态学鉴定以及粒径大小和密度的比较,发现弓形虫感染会导致DC2.4分泌的外泌体密度增加;而通过外泌体小RNA测序,发现弓形虫感染会导致外泌体中miRNA及piRNA数目增加,其中感染后显著升高的piRNA包括piR-mmu-159、piR-mmu-1526、piR-mmu-9082、piR-mmu-17405、和piR-mmu-25576.对上述piRNA靶基因的预测和KEGG分析,显示这些靶基因显著富集到MAPK、Ras、cAMP、actin细胞骨架调节、粘着斑形成、轴突导向等信号通路上.结论 弓形虫感染导致DC2.4细胞分泌的外泌体粒径尺寸峰值增大和密度增加,miRNA及piRNA数目增加,提示外泌体在弓形虫-宿主细胞互作中起着重要作用.
关键词：弓形虫DC2.4细胞外泌体小RNA
资助基金：国家自然科学基金(81572012)国家自然科学基金(81772217)国家自然科学基金(201828006)国家自然科学基金(81971954)国家重点研发计划(2017YFD0500400)广东省自然科学基金重点项目(2016A030311025)广东省自然科学基金重点项目(2017A030313694)广东省科技计划(2018A050506038)广州市科学研究计划重点项目(201904020011)
论文发表日期：2020-05-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 727-732 )
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