Orexin-A通过激活OX1R、OX2R和非Ca2+依赖的PKC抑制新生大鼠脊髓腹角神经元的γ-氨基丁酸电流
杨鑫宇1
朱苏月1
靳娜1
李妍1
甄骋1
张环环2
徐爱萍3
汪萌芽3
郑超4
1.皖南医学院生理科学研究所神经生物学研究室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院生理科学研究所细胞电生理研究室,安徽 芜湖 2410022.皖南医学院生理科学研究所心理生理学研究室,安徽 芜湖 2410023.皖南医学院生理科学研究所细胞电生理研究室,安徽 芜湖 2410024.皖南医学院生理科学研究所神经生物学研究室,安徽 芜湖 241002
摘要：目的 研究orexin-A对脊髓腹角神经元促离子型γ-氨基丁酸(GABA)受体功能的影响及其机制.方法 选取7～12 d的新生SD大鼠,麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓节段并切片.使用木瓜蛋白酶(Papain,0.18 g/30 mL人工脑脊液)消化切片并孵育40～60 min.显微镜下保留腹角,使用抛光的不同口径的巴斯德吸管急性机械分离单个细胞,待细胞贴壁后,应用膜片钳记录联合药理学方法对状态良好的神经元开展研究.在电压钳模式下记录,结合预处理给药方式,应用GABA受体激动剂γ-氨基丁酸记录在脊髓腹角神经元诱发的电流,给予orexin-A观察其对GABA电流的调制作用,先后给予OX1R选择性拮抗剂SB334867、OX2R选择性拮抗剂TCSOX229、PKC抑制剂Bis-IV、PKC激动剂PMA、PKA抑制剂Rp-cAMP、Ca2+螯合剂BAPTA等药物分析orexin-A对GABA电流调制的作用机制.结果 分离的脊髓腹角神经元形态良好,胞体形状多样,表面光洁,立体感较强且突起较长;给予orexin-A后,GABA诱发的电流幅值被显著制抑(P＜0.001,n=49),抑制率为(67.48±12.50)%;同时给予SB334867和TCSOX229可完全取消orexin-A对GABA电流的抑制作用(P=0.93,n=6);单独应用SB334867(P=0.001,n=8)或TCSOX229 (P=0.02,n=8)均部分解除orexin-A对GABA电流的压抑作用;给予Bis-IV后,orexin-A不再压抑GABA电流(P=0.31,n=5);PMA可模拟orexin-A的作用,显著抑制GABA电流,抑制率为(60.79±10.94)%,在此基础上,orexin-A不能进一步压抑GABA电流(P=0.15,n=6).给予Rp-cAMP后,orexin-A仍可显著压抑GABA电流(P=0.001,n=5).在无Ca2+细胞外液(P=0.004,n=8)或胞内应用BAPTA(P=0.04,n=7)时,orexin-A对GABA电流的压抑作用不受影响.结论 Orexin-A抑制脊髓腹角神经元的GABA电流,该效应可能经由OX1R和OX2R共同介导以及非Ca2+依赖的PKC信号通路的参与.
关键词：Orexin-AOrexin受体脊髓腹角神经元γ-氨基丁酸膜片钳记录蛋白激酶C
资助基金：国家自然科学基金(31200828)国家自然科学基金(31271155)安徽省高等学校自然科学研究项目(KJ2019A0411)安徽省高等学校自然科学研究项目(KJ2018A0266)安徽省高等学校优秀青年人才支持计划(gxyqZD2016175)安徽省高等学校优秀青年人才支持计划(gxyq2017034)安徽省自然科学基金(1908085QC132)皖南医学院博士科研启动基金(rcqd201609)
论文发表日期：2021-05-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 694-701 )
英文信息