溶酶体膜蛋白Sidt2缺失导致肝脏细胞自噬受损
耿梦雅1
王李卓2
章尧2
裴文俊3
漆梦湘4
杨梦4
许家豪4
梁洋洋4
吕坤5
何春玲6
高家林7
1.皖南医学院 弋矶山医院内分泌科,安徽 芜湖 241002;皖南医学院 弋矶山医院内分泌糖尿病研究所,安徽 芜湖 241002;皖南医学院 临床医学院,安徽 芜湖 2410022.皖南医学院 安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院 基础医学院生化教研室,安徽 芜湖 2410023.皖南医学院 安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室,安徽 芜湖 2410024.皖南医学院 临床医学院,安徽 芜湖 2410025.皖南医学院 中心实验室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院 重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室,安徽 芜湖 2410026.皖南医学院 弋矶山医院内分泌科,安徽 芜湖 2410027.皖南医学院 弋矶山医院内分泌科,安徽 芜湖 241002;皖南医学院 弋矶山医院内分泌糖尿病研究所,安徽 芜湖 241002;皖南医学院 安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室,安徽 芜湖 241002
摘要：目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响.方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测,同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62进行共定位,检测自噬小体对P62货物蛋白的识别与封存以及自噬溶酶体的降解.对LC3B及LAMP1进行免疫荧光共定位,检测自噬小体与溶酶体融合过程.使用LysoTracker对酸性溶酶体进行示踪.结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组及Sidt2-/-组,HL7702细胞Sidt2-/-组较Sidt2+/+组相比,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ及P62表达均增多(P<0.01),免疫荧光结果显示LC3B及P62亦明显增多(P<0.001),同时自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12表达减少(P<0.05).LC3B与P62共定位降低,LC3B与LAMP1共定位降低,酸性溶酶体数量减少(P<0.05).结论 Sidt2基因的缺失导致人肝脏细胞自噬小体对P62货物蛋白的识别和封存障碍,同时酸性溶酶体数量减少、自噬小体与溶酶体融合障碍导致自噬溶酶体途径受阻,最终导致LC3B与P62发生堆积,肝脏细胞自噬受损.
关键词：Sidt2自噬小体溶酶体融合货物蛋白
资助基金：国家自然科学基金(81471002)国家自然科学基金(81800766)安徽省重点研究与开发计划项目(1804h08020241)安徽省自然科学基金(1708085MH188)活性生物大分子研究安徽省重点实验室自主研究课题(LAB201808)安徽省高等学校人文社会科学研究项目(SK2019A0214)皖南医学院校级重点科研基金项目(WK2020Z02)皖医弋矶山医院高峰培育计划(GF2019J07)皖医弋矶山医院攀峰培育计划(PF2019013)
论文发表日期：2021-08-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1207-1213 )
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