p300诱导的乙酰化修饰参与脂多糖诱导的炎症介质合成
胡柯1
曹湘玉1
李玉娴1
刘灵丽1
陈月富1
陈立军1
黄民江1
谭碧峰2
尹辉明3
1.湖南医药学院医学院,湖南 怀化 4180002.湖南医药学院第一附属医院心血管内科,湖南 怀化 4180003.湖南医药学院第一附属医院呼吸与危重症医学科,湖南 怀化 418000
摘要：目的 探讨辅助激活因子p300诱导的乙酰化修饰介入脂多糖(LPS)诱导的炎症介质合成过程及其作用机制.方法 Agilent Sureprint G3 Mouse Gene Expression V2微阵列芯片以及蛋白免疫印迹(WB)技术联合于小鼠巨噬细胞(RAW246.7)中筛选表达水平与LPS刺激强度相关的分子;凝胶电泳迁移实验(EMSA)以及染色质免疫共沉淀(chip-qpcr)方法验证相关分子与炎症基因IL-6以及TNF-α启动子部位的结合现象;相关分子过表达或干扰质粒转染RAW246.7后,WB法检测转染质粒的作用效果,ELISA方法检测IL-6以及TNF-α合成水平,染色质免疫沉淀-测序技术(chip-seq)分析炎症基因启动子部位相关分子的结合以及H3K27的乙酰化修饰水平.结果 微阵列芯片以及WB技术共同证实p300的表达与LPS刺激强度存在较好关联.免疫共沉淀证实了p300与c-myb存在结合现象.EMSA证实c-myb可与炎症基因启动子序列结合,而p300不能直接结合;chip-qPCR表明当c-myb被干扰时,p300不能与炎症基因启动子序列结合.WB检测显示过表达或干扰质粒均能够干预相关分子的表达,且p65、p300以及c-myb 3者在表达上无相互影响.ELISA联合chip-seq显示与对照组比较,p300过表达以及LPS刺激均可导致炎症基因启动子部位结合的p300和H3K27乙酰化修饰水平增加,从而促进p65与启动子的结合和炎症基因转录(P<0.05);而c-myb表达被干扰时,p300过表达以及LPS刺激诱导的p300与p65在启动子的结合、H3K27乙酰化修饰和炎症介质合成均被遏制(P<0.05).在p65干扰相关组别中,p65与启动子的结合以及炎症基因转录均被抑制(P<0.05),但未对p300的结合以及H3K27乙酰化水平造成影响.结论 LPS刺激可诱导p300合成,后者在c-myb介导下结合于炎症基因启动子区域,并通过乙酰化H3K27易化启动子与p65结合,从而促进炎症基因表达.
关键词：p300乙酰化脂多糖炎症介质合成
资助基金：国家自然科学基金(82070081)湖南省临床医疗技术示范基地立项项目(2020SK4020)
论文发表日期：2022-03-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 321-329 )
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