鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价
李舒雨1
杨启鑫1
左安娜1
田林华2
霍金海2
蒙艳丽2
汤庆发1
王伟明3
1.南方医科大学中医药学院//广东省中药制剂重点实验室//广东省中药制剂技术工程实验室,广东 广州5105152.黑龙江中医药科学院中药所,黑龙江 哈尔滨 1500363.南方医科大学中医药学院//广东省中药制剂重点实验室//广东省中药制剂技术工程实验室,广东 广州510515;黑龙江中医药科学院中药所,黑龙江 哈尔滨 150036
摘要：目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用.方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白(P2),并质谱分析P2蛋白组成.细胞实验分组:C57BL/6小鼠24只,随机分3组(8只/组).对照组、模型组(5 ng/mL TGF-β1处理)、SB431542组(2μmol/L)和鲜广地龙纯化蛋白P2组(13.125μg/mL).动物实验分组:对照组(不处理)、模型组(博来霉素处理)、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2(5 mg/mL).造模后给药21 d,在第22天进行取材.采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制;流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡;HE和Massson染色观察其对肺组织的病理学变化;RT-PCR、Western blot检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen I的调节;机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用,进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用.结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2.体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用(P<0.01),降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达(P<0.001或P<0.01),升高E-cadherin的表达(P<0.01),可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达(P<0.001或P<0.01).体内实验显示,P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域.结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2,且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程.
关键词：鲜广地龙蛋白纯化质谱分析TGF-β/Smad肌成纤维细胞
资助基金：国家自然科学基金(81603367)
论文发表日期：2022-04-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 618-624,封3 )
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