TRAF6通过内源性凋亡通路促进卡介苗诱导的巨噬细胞凋亡
马沁梅1
刘莉1
于嘉霖1
宫照乾1
王晓平2
吴晓玲1
邓光存1
1.西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室,宁夏 银川 750021;宁夏大学生命科学学院,宁夏 银川7500212.宁夏回族自治区第四人民医院,宁夏 银川 750021
摘要：目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对卡介苗(BCG)诱导巨噬细胞凋亡的调控作用.方法 Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞,在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达.时间梯度试验处理组分为5组:对照组(未感染,C)、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组;感染复数试验处理组分为5组:对照组(未感染,C)、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组.随后,通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达,并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型.TRAF6敲减实验分为4组:阴性对照组(NC)、BCG单独感染组(BCG)、TRAF6小干扰RNA单独处理组(siRNA)和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组(siRNA+BCG).利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化.通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化.利用Western blot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-2,BAX的表达.使用免疫荧光技术检测TRAF6与Caspase 3的表达.结果 与健康人群相比,活动性结核患者外周血中TRAF6高表达(P<0.001).BCG感染显著上调RAW264.7中TRAF6与Caspase 3的表达,且当感染时间为18 h(P=0.03,P=0.04),感染复数为15时二者表达量最高(P<0.001,P<0.001).敲减TRAF6上调BCG感染的巨噬细胞内的菌载量(P=0.05).与BCG单独处理组相比,敲减TRAF6显著抑制BCG感染的巨噬细胞凋亡率(P<0.001),并显著下调Caspase 3(P=0.002)和PARP的表达(P<0.001).同时,BCG感染RAW264.7细胞的线粒体膜电位上升(P<0.001),而敲减TRAF6抑制BCG感染的巨噬细胞线粒体膜电位(P<0.001).敲减TRAF6显著下调BCG感染巨噬细胞中BAX表达(P=0.005)的同时上调Bcl-2的表达(P=0.04).结论 TRAF6通过内源性凋亡通路促进BCG感染的巨噬细胞凋亡.
关键词：TRAF6卡介苗巨噬细胞细胞凋亡内源性细胞凋亡
资助基金：国家自然科学基金(32060160)国家自然科学基金(32160162)宁夏自然科学基金项目(2022AAC02009)
论文发表日期：2022-09-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 1279-1287 )
英文信息