Numb通过上调V1G1的表达激活近端肾小管细胞mTORC1信号通路
刘泽1
尤达2
李勇1
何咏梅1
李阿芳1
李潘1
李春艳3
1.湘南学院 护理学院,湖南 郴州 4230002.湘南学院 临床学院,湖南 郴州 4230003.湖南中医药大学护理学院,湖南 长沙 410000
摘要：目的 探讨Numb对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)复合物1(mTORC1)信号通路活性的影响及潜在的分子机制.方法 建立Numb-siRNA转染和/或顺铂诱导的雄性BALB/c小鼠急性肾损伤模型,分为4组:NC-siRNA、Numb-siRNA、NC-siRNA+顺铂、Numb-siRNA+顺铂.免疫组化检测肾脏Numb、Megalin的表达与分布;Western blot检测各组动物肾脏中Numb、S6、p-S6、S6K1、p-S6K1、4EBP1、p-4EBP1的蛋白表达.分离培养Numb-siRNA转染的小鼠原代近端肾小管上皮细胞.体外建立Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激的大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞模型,分为NC-siRNA组、Numb-siRNA组、NC-siRNA+氨基酸刺激组和Numb-siRNA+氨基酸刺激组.Western blot检测各组细胞Numb、S6、p-S6的蛋白表达,检测沉默Numb表达前后的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及原代近端肾小管上皮细胞中AMPK、p-AMPK的蛋白表达.V1G1过表达及空白对照慢病毒感染、Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激NRK-52E细胞,分为NC-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组、Numb-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组及Numb-siRNA+V1G1过表达慢病毒+氨基酸刺激组;Western blot检测V1G1、S6、p-S6的蛋白表达.结果 与NC-siRNA组相比,Numb-siRNA组小鼠肾脏近端肾小管上皮细胞Numb及p-S6的蛋白表达均下调(P<0.05),但不影响近端小管标记蛋白Megalin的表达与分布;与对照组小鼠相比,顺铂处理组小鼠肾脏p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达均上调(P<0.05),而Numb-siRNA处理组小鼠抑制顺铂介导的p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达水平的上调(P<0.05).在NRK-52E细胞中,与氨基酸饥饿组相比,氨基酸刺激组细胞p-S6的蛋白表达上调(P<0.05),而转染Numb-siRNA的细胞中Numb及p-S6的蛋白表达较对照组均下调(P<0.05);在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及小鼠原代近端肾小管上皮细胞中,p-AMPK的蛋白表达均下调(P<0.05);在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞中,V1G1的蛋白表达下调(P<0.05),上调NRK-52E细胞中V1G1的蛋白表达,可以逆转Numb沉默介导的p-S6的降低(P<0.05).结论 Numb可通过上调V1G1的蛋白表达促进近端肾小管上皮细胞mTORC1信号通路的活化.
关键词：NumbmTOR复合物1AMP活化蛋白激酶V1G1NRK-52E细胞
资助基金：湖南省教育厅优秀青年项目(19B525)湘南学院高层次人才研究基金(063)湘南学院高层次人才研究基金(6011901)湘南学院校级青年英才计划(063)湘南学院校级青年英才计划(6212001)
论文发表日期：2022-10-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1462-1469 )
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