程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号轴促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的自噬
孙广瀚1
许霞1
万磊2
南淑玲1
王玉凤1
赵黎1
程卉3
王坤3
刘莹1
方妍妍2
孙朗1
朱俊1
1.安徽中医药大学中医学院,安徽 合肥 2300122.安徽中医药大学第一附属医院,安徽 合肥2300313.安徽中医药大学科研技术中心,安徽 合肥 230012
摘要：目的 研究程氏蠲痹汤(JBT)通过PI3K/Akt/mTOR信号轴调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)自噬的影响及相关机制.方法 实验分为4组:FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组、FLS+RAPA+JBT组.CCK8检测程氏蠲痹汤抑制RA-FLS的最佳浓度和时间,透射电镜观察细胞自噬小体的变化,自噬双标腺病毒实验观察细胞内自噬体、自噬溶酶体数量,RT-qPCR和Western blot检测相关指标表达水平.结果 CCK8实验筛选结果表明JBT冻干粉浓度在0.5 mg/mL,培养12 h效果最佳.电镜结果与自噬双标腺病毒实验结果趋势相同,FLS组中自噬体少量存在,JBT加入能显著增加自噬体,自噬溶酶体较少.RT-qPCR结果显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt和mTOR的mRNA水平降低更明显(P<0.01).WB分析显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt、mTOR蛋白的水平无明显差异(P>0.05),p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62受到了明显抑制(P<0.05).FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,Beclin-1、LC3B蛋白表达量明显上升(P<0.05).结论 程氏蠲痹汤可抑制RA-FLS的存活率,并可提高细胞自噬水平,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
关键词：程氏蠲痹汤滑膜成纤维细胞细胞自噬PI3K/Akt/mTOR
资助基金：特色技术传承专项(GZY-KJS-2020-044)安徽省高等学校自然科学研究项目(KJ2020A0378)安徽省社科规划项目(AHSKY2019D070)安徽省省级质量工程教学研究项目(2018jyxm1068)
论文发表日期：2022-11-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1726-1731 )
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