小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞
杨盼1
王圆圆1
高群伟1
刘阳1
王翼1
郭俣2
刘长青1
刘高峰1
1.蚌埠医学院生命科学学院,安徽 蚌埠 2330002.蚌埠医学院检验医学院,安徽 蚌埠 233000
摘要：目的 通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞(HEFs)重编程为化学诱导神经前体细胞(ciNPCs).方法 HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段,第1阶段是小分子组合诱导阶段,常氧条件下,将HEFs在含有小分子化合物组合VCR(VPA,CHIR99021,Repsox)的KSR培养基中培养15 d,HEFs形态发生变化,形成致密细胞集落.第2阶段是特异性诱导ciNPCs,将形成的细胞集落胰酶消化后,低粘附板中悬浮培养,可以形成ciNPCs神经球.采用CM-DiI染料标记P3代ciNPCs,并将其移植于6-OHDA法制作的帕金森大鼠模型右脑内侧前脑束(MFB)区,检测ciNPCs在PD大鼠脑内微环境中的存活、迁移以及分化状况.结果 VCR组合诱导10d细胞开始出现明显的聚集趋势,15 d时,形成致密的细胞集落.单层培养1×105/孔中大约形成40个克隆,且AP染色呈阳性.将细胞集落消化后,低粘附板中悬浮培养培养2d,可见大量神经球形成,即为第1代ciNPCs(P1代).ciNPC高表达神经前体细胞(NPCs)特异性标记物(Nestin、Pax6和Sox2),经体外神经特异性诱导分化,ciNPCs表达神经元特异性标记物Tuj1和星形胶质细胞特异性标记物GFAP.而且,P3代ciNPCs移植PD大鼠脑内4 周后,可以分化为Tuj1+、GFAP+、TH+和GABA+细胞.结论 VCR可以将HEFs重编程为ciNPCs,而无需引入外源性基因,为神经科学研究和神经退行性疾病的治疗提供有利的供体材料.
关键词：小分子化合物组合细胞重编程人胚胎成纤维细胞神经前体细胞
资助基金：国家自然科学基金(81771381)安徽省高校自然科学基金重点项目(KJ2021ZD0085)安徽省高校自然科学基金重点项目(KJ2021A0774)安徽省高校自然科学基金重点项目(KJ2021A0784)安徽省重点研究与开发计划项目(2022e07020030)安徽省重点研究与开发计划项目(2022e07020032)蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(Byycxz21055)国家级大学生创新创业训练计划项目(202110367043)国家级大学生创新创业训练计划项目(202110367044)国家级大学生创新创业训练计划项目(20210367058)国家级大学生创新创业训练计划项目(202110367059)
论文发表日期：2023-03-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 360-367 )
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