圣草次苷抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖和迁移:基于激活ROS/MAPKs信号轴
周慧1
张雨晴1
甘超1
范喜瑞2
戚之琳2
齐世美2
1.皖南医学院活性生物大分子重点实验室,安徽 芜湖 2410022.皖南医学院活性生物大分子重点实验室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院生物化学与分子生物学教研室,安徽 芜湖 241002
摘要：目的 探讨圣草次苷通过ROS/MAPKs信号轴调控肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的作用机制.方法 分别用0、25、50、100、150、200、250、300 μg/mL圣草次苷处理肝癌SMMC-7721细胞系24h后,CCK-8法检测细胞活性;不同浓度的圣草次苷(100、200、300 μg/mL)处理细胞后,运用划痕实验分别在24、48、72 h检测划痕愈合率,Transwell实验检测细胞迁移率,克隆形成实验检测细胞增殖能力,DAPI染色观察细胞核形态变化,Western blot检测侵袭蛋白E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、凋亡因子PARP和Pro-caspase 3以及MAPKs通路p-JNK、p-P38、p-ERK信号分子;用(分别为2、5、10 μmol/L)ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SB203580和P38抑制剂SP600125预先处理细胞2h,再用200 μg/mL圣草次苷处理细胞24 h,Western blot检测凋亡蛋白PARP的切割情况;分别用N-乙酰-半胱氨酸(NAC)(30 μmol/L)或圣草次苷(100、200、300 μg/mL)单独或共处理细胞后,通过DCFH-DA荧光探针法分别在15、30、60 min检测内源性活性氧(ROS)水平.结果 圣草次苷在50 μg/mL范围内,对细胞活力基本无影响(P>0.05);圣草次苷能够显著抑制SMMC-7721细胞的划痕愈合(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)和克隆形成(P<0.01),在300 μg/mL浓度时作用最显著;圣草次苷明显减少侵袭蛋白N-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达量(P<0.01),上调E-cadherin的蛋白表达量(P<0.05);圣草次苷诱导SMMC-7721细胞发生显著的凋亡形态学变化,Pro-caspase 3表达降低,PARP切割增多(P<0.01);圣草次苷在300 μg/mL刺激30 min时ROS表达水平较高,NAC(30 μmol/L)处理后,细胞内ROS表达水平下降明显;圣草次苷能够显著诱导MAPKs信号途径JNK、P38和ERK的磷酸化(P<0.01),U0126和SB203580能够增强圣草次苷诱导的PAPR切割,而SP600125逆转圣草次苷诱导的PARP切割.结论 圣草次苷通过促进细胞内ROS的合成,诱导MAPKs信号通路的活化,调控肝癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移和凋亡.
关键词：圣草次苷SMMC-7721ROSMAPKs
资助基金：安徽省大学生创新创业训练计划项目(S202110368008)安徽省大学生创新创业训练计划项目(201910368011)安徽省大学生创新创业训练计划项目(201910368022)安徽高校自然科学研究项目(KJ2019ZD31)安徽高校自然科学研究项目(KJ2020ZD54)皖南医学院重点科研项目(WK2018Z09)活性生物大分子研究安徽省重点实验室项目(1306C083008)
论文发表日期：2023-03-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 412-419 )
英文信息