NKD1可促进结肠癌细胞的葡萄糖吸收:基于激活YWHAE基因的转录活性
刘迁
戴宇阳
于华裔
沈颖
邓建忠
陆文斌
金建华
江苏大学附属武进医院/徐州医科大学武进临床学院,肿瘤科,江苏 常州 213017;常州市分子诊断与肿瘤精准医学重点实验室/江苏大学武进分子诊断与肿瘤精准医学研究院,江苏 常州 213017
摘要：目的 通过研究NKD1与YWHAE调控关系,分析NKD1促进肿瘤细胞增殖的新作用机制.方法 实验分组:(1)对照组:转染pcDNA3.0质粒的HCT116细胞、转染NC-siRNA的SW620细胞、正常HCT116细胞、正常SW620细胞;(2)实验组:转染pcDNA3.0-NKD1质粒的HCT116细胞、转染NKD1 siRNA的SW620细胞、HCT116-NKD1细胞、SW620-nkd1-/-细胞、转染pcDNA3.0-YWHAE质粒的SW620-nkd1-/-细胞.采用Western blot及qRT-PCR实验检测结肠癌细胞中过表达或敲除NKD1对YWHAE的蛋白及mRNA水平变化的影响.采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术检测NKD1是否结合YWHAE基因启动子区域.通过双荧光素酶报告基因实验分析NKD1对YWHAE基因启动子活性的调控作用.此外,采用免疫荧光实验分析NKD1与YWHAE相互作用情况.葡萄糖检测实验分析NKD1对肿瘤细胞吸收葡萄糖的调控作用.结果 与对照组相比,过表达(或敲除)NKD1不仅在蛋白水平增强(或降低)YWHAE的表达,还在mRNA水平增加(或降低)其表达(P<0.001).ChIP实验显示NKD1蛋白能够结合YWHAE启动子序列,双荧光素酶报告基因实验表明在结肠癌细胞中过表达(或敲降)NKD1能显著增强(或降低)YWHAE启动子的转录活性(P<0.05).此外,免疫荧光结果显示NKD1蛋白与YWHAE蛋白在结肠癌细胞内相互结合.葡萄糖水平分析实验表明,敲除NKD1明显降低结肠癌细胞对葡萄糖的吸收水平(P<0.01),而在敲除NKD1的细胞中过表达YWHAE,则细胞对葡萄糖吸收能力得到恢复(P<0.05).结论 结肠癌细胞中NKD1蛋白通过激活YWHAE基因的转录活性,促进其表达,从而促进肿瘤细胞对葡萄糖的吸收.
关键词：NKD1YWHAE葡萄糖吸收结肠癌
资助基金：国家自然科学基金(81872275)江苏省卫生健康委科研项目(M2020002)常州市科技局应用基础研究计划(CJ20220007)常州市科技局应用基础研究计划(CJ20210015)常州市科技局应用基础研究计划(CJ20220006)常州市十四五高层次卫生人才培养工程人才项目(2022CZBJ110)
论文发表日期：2023-04-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 585-589 )
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