溶酶体膜蛋白sidt2介导肝脏细胞的凋亡:不通过抑制自噬溶酶体途径
许家豪1
耿梦雅1
刘海军2
裴文俊3
顾静1
漆梦湘4
章尧2
吕坤5
宋迎迎1
刘苗苗3
胡鑫1
余翠6
何春玲7
王李卓2
高家林8
1.皖南医学院弋矶山医院内分泌科,安徽 芜湖 241002;皖南医学院弋矶山医院内分泌糖尿病研究所,安徽 芜湖 241002;皖南医学院临床医学院,安徽 芜湖 2410022.皖南医学院安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院基础医学院生化教研室,安徽 芜湖 2410023.皖南医学院安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室,安徽 芜湖 2410024.皖南医学院临床医学院,安徽 芜湖 2410025.皖南医学院中心实验室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室,安徽 芜湖 2410026.皖南医学院第二附属医院内分泌科,安徽 芜湖 2410027.皖南医学院弋矶山医院内分泌科,安徽 芜湖 2410028.皖南医学院弋矶山医院内分泌科,安徽 芜湖 241002;皖南医学院弋矶山医院内分泌糖尿病研究所,安徽 芜湖 241002;皖南医学院安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院中心实验室,安徽 芜湖 241002;皖南医学院重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室,安徽 芜湖 241002
摘要：目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2敲除后在肝脏细胞中调控凋亡的途径.方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,检测Sidt2和自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白水平,MDC染色观察自噬体形成情况,通过EdU和流式细胞实验观察Sidt2对肝脏细胞增殖活性和凋亡的影响,并且使用0、10、25、50、100、200μmol/L的氯喹(CQ)摸索肝脏细胞CQ饱和浓度,检测对其自噬流的影响,以及使用CQ进一步探索影响肝脏细胞的增殖活性其凋亡水平的机制.结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组及Sidt2-/-组.Sidt2基因缺失可导致肝脏细胞增殖被抑制和凋亡水平的增加,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和P62在蛋白水平上的表达均增加且自噬体含量增加(P<0.05).结果 显示50μmol/L CQ作用下肝脏细胞自噬达到饱和状态,50μmol/L CQ使Sidt2基因缺失时LC3B和P62的表达均增加(P<0.05),且CQ进一步降低肝脏细胞活性,并促进其凋亡水平(P<0.05).结论 在离体水平上,Sidt2基因剔除后,HL7702细胞可表现自噬通路的异常,并且不通过抑制自噬溶酶体途径介导和调控凋亡.
关键词：Sidt2人肝脏细胞凋亡自噬增殖
资助基金：国家自然科学基金(81471002)国家自然科学基金(81800766)安徽省自然科学基金(2108085MH267)安徽省大学生创新创业训练计划项目(202010368117)活性生物大分子研究安徽省重点实验室自主研究课题(LAB201808)皖南医学院大学生科研资助项目(WK2022XS50)皖南医学院校级重点科研基金项目(WK2020Z02)皖医弋矶山医院高峰培育计划(GF2019J07)皖医弋矶山医院攀峰培育计划(PF2019013)
论文发表日期：2023-04-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 637-643 )
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