RITA体外选择性抑制BAP1缺失的皮肤黑色素瘤细胞的生长
石文惠1
刘小莲2
张贵明1
叶林萱2
周润华1
李亦蕾2
余乐1
1.南方医科大学药学院药物设计与发现研究创新群体,广东 广州 5105152.南方医科大学南方医院临床药学中心,广东 广州 510515
摘要：目的 构建抑癌基因BAP1敲除的皮肤黑色素瘤细胞模型,筛选对BAP1缺失的皮肤黑色素瘤细胞具有选择性抑制活性的小分子化合物.方法 选择表达野生型BAP1的皮肤黑色素瘤细胞利用CRISPR-Cas9系统敲除BAP1基因,获得与亲代细胞同基因型的BAP1敲除克隆,通过MTT法筛选化合物库中对BAP1敲除细胞具有选择性抑制活性的小分子化合物.通过挽救实验,明确BAP1敲除细胞对化合物的敏感性是否与BAP1蛋白缺失直接相关.流式细胞术检测化合物对细胞周期和凋亡的影响.Western blotting检测化合物对蛋白表达的影响.结果 化合物库中的p53激活剂RITA选择性抑制BAP1敲除细胞的细胞活力.过表达野生型BAP1能够逆转BAP1敲除细胞对RITA的敏感性,而过表达去泛素化酶失活的突变型BAP1(C91S)没有挽救作用.与BAP1野生型对照细胞相比,BAP1敲除细胞对RITA引起的细胞周期阻滞和凋亡更为敏感(P<0.0001).BAP1敲除增加了细胞p53蛋白的基础水平,而RITA处理后进一步增加p53蛋白表达(P<0.0001).结论 BAP1缺失导致皮肤黑色素瘤细胞对p53激活剂RITA敏感.BAP1的去泛素化酶活性与细胞对RITA的敏感性直接相关.BAP1敲除导致p53蛋白增加可能是细胞对RITA敏感的一个关键原因.
关键词：皮肤黑色素瘤BAP1RITAp53细胞周期细胞凋亡
资助基金：国家自然科学基金(81973357)眼科学国家重点实验室开放研究基金(2022KF06)广东省自然科学基金项目(2022A1515011824)广东省药学会研究基金(2022ZX02)广东省药学会研究基金(2022ZX05)
论文发表日期：2023-05-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 710-717 )
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