小鼠初级精母细胞GC-2中TUBB4B的表达及其对NF-κB和MAPK信号通路的调控
刘桐佳1
王万伦1
张婷1
刘爽1
边艳超1
张传领2
肖瑞1
1.内蒙古医科大学内蒙古自治区分子病理学重点实验室,内蒙古 呼和浩特 0100592.内蒙古医科大学药学院,内蒙古 呼和浩特 010059
摘要：目的 探究微管蛋白(TUBB4B)与胞浆羧肽酶(CCP1)在小鼠初级精母细胞(GC-2)中的互相作用关系,以及TUBB4B在调控GC-2发育中的作用.方法 使用慢病毒感染GC-2细胞分别构建TUBB4B基因敲减组(TUBB4B-KD组)和阴性对照组(NC-KD组);TUBB4B基因过表达组(TUBB4B-OE组)与阴性对照组(NC-OE组),利用嘌呤霉素筛选稳定细胞株.采用RT-qPCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功,并进一步探究在GC-2细胞中TUBB4B与CCP1二者之间相互调控的表达关系.CCK8及流式细胞术检测TUBB4B沉默和过表达后对GC-2细胞增殖及周期的影响;Western blot及细胞免疫荧光实验找出TUBB4B沉默和过表达后发生表达改变的信号通路因子,并在细胞水平上进行标记验证.结果 GC-2中与NC-KD(NC-OE)组相比,TUBB4B沉默和过表达后,CCP1在mRNA和蛋白水平上的表达均发生一致的性改变(P<0.05);同样CCP1敲减和恢复表达后与NC组相比,TUBB4B的表达也随之发生一致的性改变(P<0.05).CCK8和流式细胞术实验发现TUBB4B敲减和过表达对GC-2的增殖速率和细胞的周期无明显改变.Western blot和细胞免疫荧光实验显示TUBB4B敲减和过表达后,细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路关键蛋白:p65,p-p65与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路关键蛋白:ErK1/2,p-ErK1/2会发生相应的明显改变(P<0.05);而CCP1敲减后会明显影响PolyE表达(P<0.05).结论 在GC-2细胞中TUBB4B与CCP1表达相互调控为正向作用,且CCP1对TUBB4B具有去谷氨酰化修饰作用,TUBB4B参与初级精母细胞中NF-κB和MAPK信号通路的调控.
关键词：雄性不育胞浆羧肽酶微管蛋白初级精母细胞NF-κB通路MAPK通路
资助基金：国家自然科学基金(31760304)内蒙古科技计划项目(2019GG154)内蒙古自然基金项目(2020LH03016)内蒙古医科大学重点项目(YKD2022ZD018)
论文发表日期：2023-06-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1002-1009 )
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