槲皮素诱导肝星状细胞凋亡:基于调控miR-146影响PI3K/Akt信号通路
高晓阳
赵晓璐
张春艳
颜羽昕
金蓉
马月宏
内蒙古医科大学基础医学院,内蒙古自治区 呼和浩特 010000
摘要：目的 探讨槲皮素(Que)通过调控肝星状细胞内miR-146水平影响PI3K/Akt信号通路诱导细胞凋亡的作用机制.方法以大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)为研究对象,设计实验分组:空白对照组、TGF-β组、TGF-β+Que-L(40 μmol/L)、TGF-β+Que-M(60 μmol/L)和TGF-β+Que-H(80 μmol/L)为药物治疗部分;各组阴性对照组、miR-146模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)为细胞转染部分.CCK-8法检测不同浓度的Que对细胞抑制情况,选出低、中、高3个剂量浓度用于后续细胞实验;细胞凋亡流式细胞术检测Que对HSCs细胞凋亡的影响;RT-qPCR法检测HSC-T6细胞药物治疗以及细胞转染后miR-146、α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K和Akt mRNA表达情况;Western blot法检测以上各组中α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达情况;免疫荧光实验检测HSC-T6细胞药物治疗中α-SMA、CollagenⅠ蛋白表达强弱.结果 CCK-8实验结果显示,相同时间不同浓度时,与Control组相比,随着药物浓度的递增,细胞A450 nm值显著降低(P<0.05);相同浓度不同时间比较,发现药物浓度在40、60、80 μmol/L时细胞A450 nm值间的差异最为显著.流式细胞术检测结果显示,Que各给药组总细胞凋亡率均显著升高(P<0.01).Que对HSC-T6细胞的作用结果显示,与Control组相比,TGF-β组α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K和Akt的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与TGF-β相比,Que各治疗组α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05).免疫荧光实验显示Que能显著减弱TGF-β组中α-SMA、CollagenⅠ蛋白的荧光强度.Que显著上调HSC-T6细胞中miR-146表达(P<0.01);与各自阴性对照组相比,miR-146 mimic显著降低α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),而miR-146 inhibitor使上述指标mRNA和蛋白表达水平显著逆转(P<0.05).结论Que通过上调miR-146影响PI3K/Akt信号通路来抑制HSCs增殖,促进其凋亡.
关键词：槲皮素肝星状细胞miR-146PI3K/Akt信号通路
论文发表日期：2023-10-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 1725-1733 )
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