外胚层间充质干细胞来源的外泌体通过控制炎症和氧化损伤减少M1型小胶质细胞并促进H2O2处理后PC12细胞的存活
孙晓鹏1
史航1
张磊1
刘中2
李克威2
钱玲玲3
朱星宇1
杨康佳1
付强2
丁华1
1.江苏大学附属人民医院骨科,江苏 镇江 2120002.上海交通大学医学院附属第一人民医院骨科,上海 2000803.江苏大学医学院,江苏 镇江 212013
摘要：目的 探究外胚层间充质干细胞来源的外泌体(EMSCs-exo)对脊髓继发性损伤的潜在修复作用.方法 从大鼠鼻黏膜中分离培养EMSCs,并通过免疫荧光染色鉴定.采用超速离心法获取EMSCs-exo,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Western blot进行鉴定.利用差速贴壁法纯化小胶质细胞,并通过免疫荧光染色鉴定.根据BCA法测得的蛋白浓度对EMSCs-exo进行定量分析.设置对照组、含100 μg/L脂多糖(LPS)的组和含LPS及37.5 mg/L或75 mg/L EMSCs-exo的组对小胶质细胞进行处理.设置对照组、含400 μmol/L H2O2的组和含H2O2及37.5 mg/L或75 mg/L EMSCs-exo的组对PC12细胞进行处理.通过Western blot和qRT-PCR测定小胶质细胞各组Arg1和iNOS蛋白和mRNA表达量.通过酶联免疫吸附实验测定上清中IL-6、IL-10和IGF-1的浓度.通过CCK-8和Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测PC12细胞各组的活力和凋亡情况.结果 免疫荧光染色显示EMSCs高表达标志物Nestin、CD44、CD105、Vimentin.透射电镜显示EMSCs-exo呈典型的杯状结构,NTA显示其平均粒径为142 nm,Western blot显示其表达外泌体标志蛋白CD63、CD81、TSG101,不表达Vimentin.当小胶质细胞在LPS环境中时,75 mg/L的EMSCs-exo能够有效提高其Arg1蛋白量、降低iNOS蛋白量(P<0.05),且相比于37.5 mg/L的浓度,其更能有效提高其Arg1 mRNA水平和IGF-1、IL-10(P<0.05)的生成,降低iNOS mRNA水平和IL-6的生成(P<0.05);也更有效促进H2O2环境中PC12细胞的存活,降低凋亡率(P<0.05).结论 75 mg/L的EMSCs-exo在体外有效减少M1型小胶质细胞比例,减轻氧化应激下的神经元凋亡,促进神经元存活,因此在控制脊髓继发性损伤中具有一定应用潜能.
关键词：外胚层间充质干细胞外泌体小胶质细胞炎症氧化应激脊髓继发性损伤
资助基金：江苏省卫生健康委员会项目(Z2020058)江苏大学临床医学科技发展基金项目(JLY2021012)镇江市卫健委金山医者人才项目(2022-JSYZ-1)江苏省高层次卫生人才六个一工程拔尖人才科研项目(LGY2020065)江苏省研究生实践创新计划项目(SJCX21-1725)
论文发表日期：2024-01-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 119-128 )
英文信息