敲低结肠癌转移相关基因1促进RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡
孙硕1
黄鑫2
李国东3
张春云1
卢泽梅1
张伟伟2
李泽彦1
杨清竹2
1.齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江 齐齐哈尔 1610062.齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江 齐齐哈尔 161006;抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室,黑龙江 齐齐哈尔 1610063.哈尔滨医科大学附属第四医院普外科,黑龙江 哈尔滨 150001
摘要：目的 探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)对RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导的结直肠癌细胞铁死亡的影响及其分子机制.方法 体外培养结直肠癌细胞SW620,HCT116,LOVO及RKO细胞,Western blot实验检测细胞中MACC1表达;以SW620细胞为实验材料,MTT法检测不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)铁死亡诱导剂RSL3以及不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞存活率的影响,分析单独使用10 μmol/L RLS3以及10 μmol/L RLS3和10 μmol/L Fer-1联合作用对SW620细胞存活率的影响,并检测干扰MACC1后不同浓度RSL3对SW620细胞存活率的影响;实时定量RT-PCR和Western blot法检测不同浓度RSL3(0、2.5、5、10 μmol/L)对MACC1在mRNA和蛋白水平的影响,并检测干扰MACC1后GPX4在mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞仪及激光共聚焦实验检测干扰MACC1后,SW620细胞中脂质过氧化Lipid ROS水平的变化.结果 4种结直肠癌细胞中SW620细胞MACC1表达量最高;铁死亡诱导剂RSL3抑制SW620细胞的存活率,细胞存活率随RSL3浓度升高而降低,呈剂量依赖性;不同浓度的铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞的存活率没有影响;与对照Ctrl组细胞存活率相比,单独使用RSL3细胞存活率降低了50%(P<0.01),而联合使用RSL3与Fer-1处理SW620细胞,细胞的存活率得到恢复(P>0.05);不同浓度的RSL3作用于SW620细胞后,细胞中MACC1基因在mRNA和蛋白水平被显著抑制(P<0.01),具有一定的药物浓度依赖性.siRNA干扰MACC1基因表达后,增强RSL3对SW620细胞毒作用,并抑制细胞中GPX4的表达(P<0.01),增加细胞中Lipid ROS水平(P<0.05).结论 MACC1通过调控GPX4影响RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡.
关键词：RAS选择性致死化合物3铁死亡结肠癌转移相关基因1谷胱甘肽过氧化物酶4
资助基金：黑龙江省自然科学基金联合引导项目(LH2022H032)黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目(135509222)齐齐哈尔大学研究生创新科研项目(160611122024)齐齐哈尔大学研究生创新科研项目(QUZLYS_CX2023010)黑龙江省大学生创新创业训练计划资助项目(S202310232127)
论文发表日期：2024-01-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 173-178 )
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