肠道硝酸盐对肺炎克雷伯菌生长的影响及其调控机制
谢继臣1
马仁惠1
李默然1
李蓓1
熊莉娜2
1.湖北医药学院基础医学院,湖北 十堰 4420002.华中科技大学同济医学院附属梨园医院消化内科,湖北 武汉 430077
摘要：目的 探讨肠道硝酸盐环境对肺炎克雷伯菌生长的影响及具体调控机制.方法 构建肺炎克雷伯菌硝酸还原酶narG、narZ单基因和双基因敲除株及硝酸盐二元调控系统NarXL基因敲除株;全自动细菌生长分析仪检测菌株在体外有氧硝酸盐环境下的生长曲线;分光光度计法检测细菌厌氧硝酸盐环境下生长曲线;qRT-PCR检测二元调控系统NarXL在厌氧硝酸盐环境中对硝酸还原酶narG、narZ基因表达影响;EMSA和MST分析NarXL在感应利用硝酸盐环境中的具体调控机制;qRT-PCR检测厌氧硝酸盐环境对narG、narZ基因表达的影响;利用竞争实验检测narG、narZ基因在厌氧硝酸盐环境中的生长优势.结果 相比于有氧环境,在厌氧条件下,硝酸盐能够明显促进肺炎克雷伯菌野生株的生长且促进生长的幅度高于narXL基因敲除株;qRT-PCR显示厌氧条件下narXL敲除株中硝酸还原酶相关基因narG、narZ表达显著降低(P<0.0001);EMSA和MST实验显示NarXL调控子能够直接与narG、narZ启动子区结合;qRT-PCR显示在厌氧硝酸盐环境中硝酸还原酶narG、narZ基因表达量明显升高(P<0.0001,P<0.01);生长曲线和竞争实验表明硝酸还原酶narG基因敲除株在厌氧硝酸盐环境中生长和竞争生长能力均明显变弱(P<0.01).结论 肺炎克雷伯菌二元调控系统NarXL可感应肠道硝酸盐浓度变化直接正调控硝酸还原酶基因narG、narZ表达从而促进细菌生长.
关键词：肺炎克雷伯菌NarXL硝酸还原酶厌氧生长肠道环境
资助基金：湖北医药学院研究生科技创新项目(YC2023025)湖北医药学院人才启动金项目(2021QDJZR021)湖北省高等教育优势学科群(公共卫生)项目(2021-2025)
论文发表日期：2024-04-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 757-764 )
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