FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制结直肠肿瘤细胞的铁死亡
王南1
石斌2
马小兰1
吴伟超3
曹佳4
1.宁夏医科大学总医院 硕士培养站,宁夏 银川 7500042.宁夏医科大学总医院 急诊科,宁夏 银川 7500043.银川市第一人民医院耳鼻喉科,宁夏 银川 7500044.宁夏医科大学总医院 医学科学研究院外科学研究室,宁夏 银川 750004
摘要：目的 探讨脆性X智力障碍蛋白(FMRP)调控结直肠肿瘤(CRC)细胞逃避铁死亡的作用机制.方法 使用RT-qPCR和Western blotting方法验证FMRP在CRC细胞中的表达;利用TCGA数据库分析FMRP参与调控CRC进展的生物功能及信号通路;采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建FMRP过表达载体(Lv-FMRP)和敲低载体(siFMRP-1、siFMRP-2、siFMRP-3),细胞实验设Control组、NC组、siFMRP-1组、siFMRP-2组、siFMRP-3组、Lv-NC组、Lv-FMRP组;采用CCK8和平板克隆实验检测细胞增殖;采用MDA/ROS/GSH/Fe2+试剂盒检测细胞铁死亡水平;采用JC-1荧光染色法检测线粒体膜电位变化;采用Western blot检测铁死亡相关蛋白及RAS/MAPK信号通路相关蛋白表达;利用裸鼠皮下成瘤实验观察FMRP对肿瘤生长的影响.结果 与正常肠粘膜上皮细胞NCM460相比,FMRP在CRC细胞中明显高表达(P<0.05);TCGA数据库联合生信分析显示FMRP与活性氧调控、氧化应激诱导细胞死亡、线粒体呼吸等生物过程相关,与谷胱甘肽代谢通路相关;体外实验结果显示,与Control组相比,FMRP敲低组细胞增殖能力降低,GSH含量降低,MDA和ROS含量升高,Fe2+荧光强度增强(P<0.05),SLC7A11/GPX4蛋白表达降低,线粒体膜电位JC-1荧光强度升高,而FMRP过表达组与上述结果相反;体内实验结果显示,敲低FMRP抑制瘤体生长,抑制SLC7A11表达(P<0.01);进一步检测RAS/MAPK信号通路,发现敲低FMRP导致ERK、MEK、MAPK、RAS蛋白磷酸化水平降低,过表达FMRP上述蛋白磷酸化水平升高(P<0.05).结论 FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制细胞铁死亡促进CRC恶性进展.
关键词：FMRP铁死亡RAS/MAPK信号通路结直肠肿瘤
资助基金：宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022CMG03124)宁夏回族自治区重点研发(引才专项)项目(2021BEB04046)宁夏回族自治区第六批自治区青年科技人才托举工程项目(NXKJTJ2021119)
论文发表日期：2024-05-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 885-893 )
英文信息