蛋白4.1R对肝细胞HL-7702增殖、凋亡以及糖酵解的影响
郑孟冬
刘妍
刘娇娇
康巧珍
王婷
郑州大学生命科学学院,河南 郑州 450000
摘要：目的 探究蛋白4.1R对肝细胞增殖、凋亡以及糖酵解的影响,并初步阐明其分子机制.方法 以肝细胞株HL-7702为材料,利用CRISPR/Cas9技术构建4.1R-/-HL-7702细胞株.设置对照组为正常培养的4.1R+/+HL-7702细胞,实验组为4.1R-/-HL-7702细胞.细胞在培养24、48以及72 h时,分别用CCK-8及EdU-488染色,然后利用酶标仪以及流式细胞术检测细胞的增殖能力.细胞经Annexin V-FITC/PI染色后,流式细胞术检测HL-7702细胞在培养24、48以及72 h时的凋亡水平.利用生化试剂盒分别检测HL-7702细胞葡萄糖摄取量、乳酸分泌量以及ATP生成的变化.pH计检测培养48 h HL-7702细胞上清培养基的pH值.qRT-PCR检测HL-7702细胞糖酵解过程关键调节酶HK2、PFKL、PKM2以及LDHA的mRNA表达量.Western blotting检测AMPK、p-AMPK、Raptor以及p-Raptor的蛋白表达量.结果 Western blotting以及基因测序结果表明4.1R-/-HL-7702细胞株构建成功.与对照组相比,4.1R-/-组的CCK-8和EdU-488实验结果均显示HL-7702细胞的增殖能力降低;细胞凋亡实验结果表明,4.1R-/-HL-7702细胞凋亡水平升高.蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞葡萄糖摄取量(P<0.05)、乳酸分泌量(P<0.001)、ATP生成(P<0.001)下降,细胞上清培养基pH值(P<0.01)升高.qRT-PCR实验结果表明糖酵解过程关键调节酶的mRNA表达量均下降(P<0.001).相较于HL-7702细胞,4.1R-/-HL-7702细胞的AMPK和Raptor蛋白表达量下降,p-AMPK和p-Raptor蛋白表达量升高.结论 蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞增殖能力降低、凋亡水平增加,糖酵解过程被抑制,其调控机制与下游AMPK-mTORC1信号通路的激活密切相关.
关键词：蛋白4.1R肝细胞增殖与凋亡糖酵解
论文发表日期：2024-07-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1355-1360 )
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