川续断皂苷Ⅵ通过抑制PI3K/AKT/NF-κB通路拮抗肠上皮细胞凋亡缓解TNBS诱导的小鼠克罗恩病样结肠炎
牛民主1
殷丽霞2
段婷3
黄菊4
李静5
耿志军4
胡建国5
宋传旺6
1.蚌埠医科大学检验医学院免疫学教研室,安徽蚌埠 233030;蚌埠医科大学第一附属医院炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室,安徽蚌埠 2330042.蚌埠医科大学第一附属医院检验科,安徽蚌埠 2330043.蚌埠医科大学第一附属医院急诊内科,安徽蚌埠 2330044.蚌埠医科大学第一附属医院中心实验室,安徽蚌埠 233004;蚌埠医科大学第一附属医院炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室,安徽蚌埠 2330045.蚌埠医科大学第一附属医院检验科,安徽蚌埠 233004;蚌埠医科大学第一附属医院炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室,安徽蚌埠 2330046.蚌埠医科大学检验医学院免疫学教研室,安徽蚌埠 233030
摘要：目的 探讨川续断皂苷Ⅵ(AVI)对小鼠克罗恩病(CD)样结肠炎的肠上皮细胞凋亡和肠屏障的影响及其作用机制.方法 将30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组(WT组)、2,4,6-三硝基苯磺酸诱导模型组(TNBS组)、AVI药物治疗组(AVI组,150 mg/kg),每组10只.通过监测小鼠体质量、测量结肠长度、疾病活动度(DAI)评分、HE染色、AB-PAS染色、组织炎症评分、ELISA和RT-qPCR实验,验证AVI对小鼠结肠炎的缓解作用.采用TNF-α诱导Caco-2细胞建立体外凋亡模型,分为Control组、TNF-α组、AVI组(250 μmol/L).CCK-8实验检测AVI对Caco-2细胞活力的影响.采用免疫荧光、TUNEL实验和Western blotting检测AVI对小鼠肠上皮细胞和Caco-2细胞屏障损伤与凋亡的改善情况.利用网络药理学预测AVI干预CD的分子机制可能与PI3K/AKT/NF-κB通路有关,Western blotting检测体内外通路的蛋白表达,以及经PI3K/AKT通路激活剂(Recilisib)和AKT1 siRNA转染干预细胞后,通过TUNEL实验和Western blotting验证其对细胞凋亡的调控作用.结果 AVI能明显地缓解小鼠体质量降低、结肠缩短、DAI与组织炎症评分的增加、肠绒毛和杯状细胞的损伤,以及炎症因子的高表达(P＜0.05).AVI浓度在0～250 μmol/L时对Caco-2细胞活力无影响.体内外实验证实,AVI可阻断紧密连接蛋白的缺失,减少肠上皮细胞的凋亡(P＜0.05).KEGG富集通路分析发现AVI干预CD可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB通路活化有关,在体内外模型证实AVI干预后p-PI3K、p-AKT和p-p65的表达降低(P＜0.05).此外,Recilisib干预后可逆转AVI对通路的抑制作用和抗凋亡作用(P＜0.05),AKT1 siRNA转染细胞后证实PI3K/AKT通路可介导下游NF-κB信号的活化(P＜0.05).结论 AVI可通过拮抗肠上皮细胞的凋亡和减轻肠屏障损伤,达到改善TNBS诱导的CD小鼠结肠炎的目的,其机制可能与AVI负向调控PI3K/AKT/NF-κB有关.
关键词：克罗恩病川续断皂苷Ⅵ凋亡肠屏障PI3K/AKT/NF-κB
论文发表日期：2024-12-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：12( 2335-2346 )
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