缺氧微环境下补阳还五汤通过抑制BNIP3-PI3K/Akt通路抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的线粒体自噬
展俊平1
黄硕2
孟庆良1
范围1
谷慧敏1
崔家康1
王慧莲1
1.河南省中医院//河南中医药大学第二附属医院风湿科,河南郑州 4500022.河南中医药大学骨伤学院,河南郑州 450008
摘要：目的 在低氧微环境下,以BNIP3-PI3K/Akt信号通路为核心,研究补阳还五汤参与FLS-RA线粒体自噬的调控机制.方法 将成纤维样滑膜细胞(FLS)体外培养,分为正常对照组(FLS-RA正常培养)、模型对照组(IL-1β诱导)、补阳还五汤含药血清低、中、高干预组(IL-1β诱导+浓度分别为5％、10％、20％含药血清),除正常对照组外,其余组细胞按照10％O2浓度低氧处理.AnnexinV-APC/7-AAD双染测定细胞凋亡和T-AOC试剂盒检测细胞总抗氧化能力.探针分子测定细胞ROS,ATP试剂盒测定细胞ATP水平、线粒体膜电位(Δψm)、细胞Ca2+平衡稳态的变化.Western blotting法检测BNIP3、PI3K、AKT蛋白表达水平,RT-q PCR法检测BNIP3、PI3K、AKT及自噬相关因子LC3、Beclin-1、P62 mRNA的表达.结果 补阳还五汤组能够降低细胞的凋亡百分比(P＜0.05),且呈浓度依赖性.补阳还五汤组总抗氧化力降低,T-AOC浓度(U/mL)降低,ROS产生增加.观察到自噬小体的形成,ATP酶水平释放量增加(P＜0.05);线粒体膜电位、Ca2+水平均呈下降趋势.补阳还五汤组BNIP3蛋白表达升高,PI3K、AKT表达降低;与模型组相比,补阳还五汤组BNIP3、P62、mRNA表达升高(P＜0.05);PI3K、AKT、LC3、Beclin-1、mRNA表达降低,Beclin-1的表达差异无统计学意义(P＞0.05);LC3的表达仅在中药小剂量组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在低氧环境下,补阳还五汤可能通过抑制BNIP3介导的PI3K/AKT通路,从而抑制了自噬因子的表达.
关键词：低氧补阳还五汤类风湿关节炎滑膜成纤维细胞BNIP3-PI3K/Akt线粒体自噬
资助基金：河南省高等学校重点科研项目(22B360006)河南省中医药科学研究专项课题(2019ZY2060)
论文发表日期：2025-01-19
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 35-42 )
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