NLRP6过表达通过AMPK/CPT1A/PGC1A通路促进肝细胞脂肪氧化分解改善非酒精性脂肪肝
石情
冉苏叶
宋铃榆
杨红
王文娟
刘晗琳
刘琦
贵州医科大学附属医院消化内科,贵州贵阳 550000
摘要：目的 研究核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白6(NLRP6)在肝脏脂代谢及非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发展过程中的作用及机制.方法 构建高脂饲料喂养(HFD)模型小鼠,分为对照组(正常喂养)、模型组[高脂(脂质含量60％饮食)喂养],6只/组,持续喂养16周.构建蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(MCD)小鼠模型,分为对照组[喂养蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饮食]和模型组(喂养蛋氨酸-MCD饮食),6只/组,持续喂养8周.使用HE染色及油红O染色鉴定模型是否造模成功,免疫组化染色(IHC)检测两种小鼠模型肝脏中NLRP6的表达.在正常人肝细胞系LO2细胞中使用腺病毒过表达NLRP6,或siRNA敲低NLRP6,使用棕榈酸(PA)构建NAFLD细胞模型,NLRP6过表达处理分组Ad-Vec组、Ad-NLRP6组、Ad-Vec+PA组、Ad-NLRP6+PA组;NLRP6敲低处理分组阴性对照(NC)组、sh-NLRP6组、NC+PA组、sh-NLRP6+PA组.采用甘油三酯(TG)试剂盒、油红染色、qPCR、Westernblotting、ATP试剂盒和β-羟基丁酸试剂盒检测NLRP6对脂质代谢的影响及NLRP6对AMPK通路及使用AMPK抑制剂Compound C后AMPK通路的变化.结果 在HFD、MCD饮食诱导NAFLD小鼠模型小鼠肝脏中NLRP6表达降低(P＜0.001).在细胞实验中LO2细胞过表达NLRP6后,与Ad-Vec+PA组相比,Ad-NLRP6+PA组细胞内TG含量降低(P＜0.0001),且脂质沉积减少;敲低NLRP6,与NC+PA组相比,sh-NLRP6+PA组细胞内TG含量增加(P＜0.05),并且脂质沉积加重;与Ad-Vec+PA组相比,Ad-NLRP6+PA组PGC1A、CPT1AmRNA及蛋白表达水平增加(P＜0.01).脂质氧化分解代谢产物ATP、β-羟丁酸含量升高(P＜0.05).与Ad-Vec+PA组相比,Ad-NLRP6+PA组肝细胞中AMPK通路磷酸化水平升高(P＜0.05);使用AMPK抑制剂后,Ad-NLRP6引起的脂质氧化分解作用被抑制关.结论 NLRP6通过AMPK/CPT1A/PGC1A促进肝细胞脂肪氧化分解,改善脂质沉积.
关键词：非酒精性脂肪肝NLRP6AMPK脂肪酸氧化
资助基金：贵州省科协青年科技人才托举工程项目(GASTYESS202433)贵州医科大学附属医院马歇尔联合实验室项目(N-2021-13)贵州医科大学国家自然科学基金培育项目(21NSFCP16)国家自然科学基金(Gyfynsfc(2020)21)
论文发表日期：2025-01-19
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 118-125 )
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