METTL3介导的m6A修饰通过调节自噬促进急性髓性白血病细胞中FOXO3表达及蒽环类药物耐药性
张夏玮1
杨晶晶1
温亚男1
刘青阳1
窦立萍2
高春记2
1.解放军医学院,北京 100853;中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部,北京 1008532.解放军医学院,北京 100853
摘要：目的 探讨急性髓系白血病(AML)细胞中叉头盒蛋白3(FOXO3)与甲基转移酶样蛋白3(METTL3)表达关系及FOXO3参与AML化疗耐药的机制.方法 采用敲低或过表达METTL3和FOXO3及其对照慢病毒载体,转染AML蒽环类耐药细胞系,获取对照组、敲低组、过表达组细胞.对AML细胞采用甲基化RNA共沉淀和高通量测序技术(MeRIP-seq)和转录组测序(RNA-seq).TCGA和GSE6891数据库对AML患者临床信息及基因表达数据进行统计分析.RT-qPCR及 Western blotting检测FOXO3 mRNA及蛋白的表达水平和FOXO3 mRNA稳定性.流式细胞术和CCK-8分别检测细胞凋亡和增殖能力的变化.MeRIP-qPCR检测m6A修饰FOXO3 mRNA的表达情况.结果 蒽环类敏感及耐药AML细胞系和敲低METTL3前后细胞系差异基因均富集在FoxOs通路中,且耐药细胞中FOXO3 m6A修饰明显增加.公共数据库相关性分析显示FOXO3与METTL3表达呈正相关(P<0.01).Western blotting和RT-qPCR结果提示敲低METTL3后FOXO3表达下降(P<0.05).MeRIP-qPCR结果提示蒽环类耐药AML细胞中m6A修饰的FOXO3 mRNA表达高于蒽环类敏感AML细胞(P<0.05).稳定性试验结果提示敲低METTL3后FOXO3 mRNA稳定性降低.公共数据库分析、Kaplan-Meier分析和RT-qPCR结果提示FOXO3与AML患者预后不良相关(P<0.05).Western blotting和RT-qPCR结果显示,蒽环类耐药细胞中FOXO3的表达明显高于敏感细胞(P<0.05).体外实验显示过表达FOXO3的AML细胞后细胞增殖更快,凋亡减少(P<0.05).蒽环类敏感及耐药AML细胞系和敲低METTL3前后细胞系差异基因均富集在自噬相关通路中,抑制自噬增强阿霉素对AML细胞和过表达FOXO3细胞的抗肿瘤作用.结论 METTL3可能通过介导的m6A修饰促进FOXO3的表达,进而调节自噬促进蒽环类药物耐药细胞的增殖和抑制凋亡.
关键词：急性髓系白血病化疗耐药FOXO3METTL3RNA甲基化
论文发表日期：2025-03-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 470-478 )
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