敲除CDC20可明显抑制宫颈癌细胞的增殖及侵袭转移
莫艳秀1
舒洋2
莫钰兰3
刘峻彤1
徐欧欧1
邓华菲1
王岐本1
1.湘南学院基础医学院,湖南 郴州 4230002.湘南学院附属医院检验科,湖南 郴州 4230003.上海健康医学院药学院,上海 201318
摘要：目的 探讨细胞分裂周期蛋白20(CDC20)在宫颈癌中的功能及其对宫颈癌C33A细胞增殖、迁移以及侵袭的影响和作用机制.方法 TCGA数据库分析CDC20在宫颈癌组织中的表达情况,免疫组化(IHC)检测宫颈癌组织与癌旁组织中的CDC20和β-Catenin蛋白表达水平.利用CRISPR/Cas9设计CDC20基因双靶点的sgRNA2&7序列,构建重组质粒并测序验证.将宫颈癌细胞C33A按转染的质粒不同分为sgRNA-NC组和sgRNA-CDC20组,通过qRT-PCR和Western blotting检测CDC20的mRNA和蛋白表达水平,平板克隆检测其增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力.将2组C33A细胞分别接种于裸鼠(5只/组)双侧腋下左、右两侧,定期监测肿瘤体积并绘制其生长曲线,称取裸鼠体质量并脱臼处死.Western blotting分别检测细胞和瘤体组织中的CDC20和 β-Catenin蛋白的表达水平;免疫共沉淀(CoIP)和免疫荧光共定位验证CDC20与β-Catenin的相互作用.结果 CDC20和β-Catenin在宫颈癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.001).体外细胞实验结果显示:与sgRNA-NC组细胞比较,sgRNA-CDC20敲除株的细胞增殖能力下降(P<0.001)且细胞凋亡显著升高(P<0.01);迁移和侵袭能力受到明显抑制(P<0.05).体内动物实验结果显示:与sgRNA-NC组比较,sgRNA-CDC20组的瘤体体积生长曲线明显减小(P<0.05),但裸鼠体质量无明显变化(P>0.05);sgRNA-CDC20组中的细胞和组织中的CDC20和β-Catenin的蛋白水平明显降低(P<0.05),免疫共沉淀(CoIP)和免疫荧光验证CDC20和β-Catenin存在相关性.结论 CDC20在宫颈癌组织、细胞以及瘤体中的表达明显升高,敲除CDC20可明显抑制C33A细胞的增殖和侵袭转移能力,并促进凋亡,其机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路密切相关.
关键词：CRISPR/Cas9CDC20宫颈癌Wnt/β-Catenin
资助基金：湖南省教育厅资助科研项目(23A0589)湘南学院高层次人才科研启动基金项目(2021-A20)
论文发表日期：2025-06-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：12( 1200-1211 )
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