树豆酮酸A衍生物XJ-60通过抑制SP1/TGF-β/Smad3信号轴改善非酒精性脂肪肝病小鼠的肝纤维化
耿召碟1
胡丽1
代云莉1
罗荣刚1
徐韬1
廖旭阳1
袁质平2
王建塔3
肖瑛1
1.贵州省常见慢性疾病发病机制及防治全省重点实验室//贵州医科大学病理生理学教研室,贵州 贵阳 5500252.贵州医科大学校医院,贵州 贵阳 5500253.贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心,贵州 贵阳 550004
摘要：目的 探讨树豆酮酸A衍生物XJ-60是否可通过抑制SP1/TGF-β/Smad3信号通路发挥改善非酒精性脂肪肝肝纤维化的作用.方法 体内实验:12只db/db小鼠采用完全随机设计分成非酒精性脂肪肝模型组(NAFLD组)和给药组(XJ-60组),6只/组;db/m小鼠为正常对照组(NC组),6只/组,XJ-60组给予XJ-60 50 mg/(kg/d)灌胃给药.HE、油红O染色和组织上清液丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)判断NAFLD成模情况;免疫组织化学染色观察肝组织中特异性蛋白1(Sp1)、纤连蛋白(FN)的表达部位,Western blotting观察肝组织中Sp1、上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)、细胞外基质(ECM)相关指标的表达情况;ELISA检测肝组织中白介素-6(IL-6)的表达;Sp1与钙黏蛋白(E-ca)和Sp1与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)进行相关性分析.体外实验:采用CCK8法筛选XJ-60治疗NAFLD的有效浓度;AML12细胞分为正常对照组(NC组),NAFLD模型组(PO组)采用游离脂肪酸刺激复制模型;溶剂对照组(PO+DMSO组)在PO组的基础上加入与XJ-60相同剂量的DMSO作对照;药物治疗组(PO+XJ-60组)加入游离脂肪酸后加入不同浓度梯度的XJ-60.油红O染色观察各组肝细胞脂滴沉积情况;Western blotting和Real-time qPCR检测各组SP1、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad3、p-Smad3、EMT、ECM相关指标的表达情况;免疫荧光染色观察SP1、p-Smad3定位情况;并通过敲低SP1验证TGF-β/Smad3信号轴在NAFLD中的作用.结果 体内实验结果表明XJ-60可降低db/db小鼠甘油三酯和总胆固醇(P<0.05);模型组HE、油红O染色以及ALT、AST提示存在肝细胞损伤且肝脏脂滴沉积模型复制成功(P<0.05);NAFLD组小鼠肝脏已出现炎性 细胞浸润和纤维化表型,XJ-60组有所改善;XJ-60组IL-6降低(P<0.05);FN、SP1分别在细胞质和细胞核中表达增多;相关性分析结果提示Sp1和E-ca呈负相关和α-SMA呈正相关(P<0.05).体外实验中XJ-60治疗NAFLD最佳浓度为10 μmol/L(P<0.01),且PO组AML12细胞中的脂滴沉积增多,XJ-60组脂滴沉积减少(P<0.01);与PO组相比,XJ-60治疗后ECM和EMT相关指标mRNA水平和蛋白水平表达均降低(P<0.05),SP1、TGF-β、p-Smad3蛋白表达水平降低(P<0.05).敲低SP1可显著降低TGF-β、p-Smad3和ECM的表达(P<0.05).结论 XJ-60在db/db小鼠NAFLD肝脏中发挥的抗纤维化作用及改善脂滴沉积的作用机制可能是通过抑制SP1的表达从而抑制TGF-β/Smad3信号通路致纤维化作用,减少下游细胞外基质的分泌和沉积.
关键词：非酒精性脂肪肝特异性蛋白1转化生长因子-βSmad3蛋白树豆酮酸A衍生物
论文发表日期：2026-02-20
在线出版日期：2026-03-04（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：12( 362-373 )
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