白及SRAP-PCR反应体系正交设计优化及引物筛选
桂腾琴
李春艳
韦燕
武忠亮
张思平
兴义民族师范学院生物与化学学院,贵州 兴义 562400;贵州省民族药用生物资源研究与开发重点实验室,贵州 兴义 562400
摘要：建立白及Bletilla striata Rchb.f.最佳SRAP-PCR(sequence-related amplified polymorphism polymerase chain reaction,SRAP-PCR)反应体系,为从分子水平开展白及不同地理群体的分子遗传学评价研究提供相关的技术支持.以采自于贵州省安龙县白及嫩叶为材料,应用正交设计L9(34)对反应体系中 4 个因素(引物、Taq DNA聚合酶、Mg2+和dNTPs)的用量进行优化,正交设计引物组合为(Me1/Em1),探索建立白及最佳SRAP-PCR反应体系并对引物进行筛选,筛选稳定性高、多态性好的引物组合.结果表明:白及的最佳SRAP-PCR反应体系(25 μL)为:2.50 μL10×Buffer、2.50 mmol·L-1Mg2+、0.30 mmol·L-1dNTPs、0.25 μmol·L-1 引物、1.50 U Taq DNA聚合酶以及 20～80 ng模板DNA.利用 21 份白及对最佳SRAP-PCR反应体系稳定性检测,该体系稳定性高、重复性好.以白及基因组DNA为模板,选用最佳的SRAP-PCR反应体系对80 对引物组合进行筛选,最终获得多态性引物 13 对,共扩增出 182 个位点,其中多态性位点152 个,多态性位点百分比为 83.52%.该体系稳定性高、重复性好,为后续遗传多样性研究提供相关的技术支持.
关键词：白及正交设计SRAP-PCR体系优化引物筛选
分类号：Q75(分子遗传学)
论文发表日期：2025-03-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 18-24 )
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