大肠杆菌中β-烟酰胺单核苷酸的生物合成与条件优化
翁萍萍
包添祺
卢蓓丝
郑晓音
杨欣伟
工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心/福建师范大学生命科学学院,福建 福州 350108
摘要：为了提高大肠杆菌通过多酶级联反应(以烟酰胺和核糖为底物)生成β-NMN的产量,以实验室前期构建的工程菌B20 为基础,通过对关键酶烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)进行替换,构建出了重组菌B26.为了提高其性能,采用单因素试验对反应体系的pH、烟酰胺的流加方式、Mg2+浓度、多聚磷酸激酶(PPK)的启动底物以及无机多聚磷酸盐的添加策略进行了优化.结果表明:B20 和B26 这 2 株工程菌产量无显著性差异,但是表达关键酶CpNAMPTY15S的工程菌B26 生物量为B20 的 1.78 倍,NMN总产量可增加 71.6%.单因素试验结果确定在含有终浓度为 15 mmol·L-1 Mg2+、5 mmol·L-1 AMP与 25 mmol·L-1 无机磷酸盐的 20 mL催化体系中,分别在 0、6h分批流加终浓度为 25 mmol·L-1 的烟酰胺,同时维持pH为 7.0 为NMN以核糖和烟酰胺作为直接底物催化反应的最适条件.在此条件下进行 12h多酶级联反应,最终NMN产量达到 9.09 g·L-1.通过筛选优势菌株以及优化反应条件有效提高大肠杆菌生物合成NMN的产量,为NMN的规模化生产提供一种成本效益高的参考方法.
关键词：大肠杆菌β-烟酰胺单核苷酸烟酰胺核糖
分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)
资助基金：福建省自然科学基金面上项目(2021J01170)
论文发表日期：2025-03-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 38-44 )
英文信息