无大肠杆菌宿主DNA残留的Taq DNA聚合酶的表达与纯化
吕新
刘兰英
李玥仁
罗土炎
福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,福建 福州 350003;福建省农产品质量安全重点实验室,福建 福州 350003
摘要：为彻底去除Taq DNA聚合酶中的大肠杆菌宿主DNA残留,旨在开发一种高效的表达与纯化策略,以满足分子生物学研究和临床应用对高纯度Taq DNA聚合酶的需求.采用pET-15b质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达Taq DNA聚合酶,通过IPTG诱导实现目标蛋白的高水平表达,并结合Ni-NTA亲和层析与DEAE阴离子交换层析的纯化策略,实现对表达产物的高效纯化.结果表明:优化后的流程成功获得纯度超过 95％的Taq DNA聚合酶;PCR检测大肠杆菌 16S rRNA基因结果显示,自制Taq DNA聚合酶中未检出宿主DNA,其残留量与市售Taq DNA聚合酶相当.与传统的热失活结合硫酸铵沉淀或单一Ni-NTA亲和层析方法相比,优化的纯化流程能够更彻底地去除大肠杆菌宿主DNA残留,为高纯度Taq DNA聚合酶的制备提供了一种高效、可行的新策略.
关键词：Taq DNA聚合酶表达与纯化宿主DNA残留
分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)
资助基金：福建省科技计划(2021R1022007)福建省财政专项——福建省农业科学院科技创新团队建设项目(CXTD2021011-3)福建省人民政府、中国农业科学院协同创新工程(XTCXGC2021020)
论文发表日期：2025-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
英文信息