奶牛胎儿细胞多位点基因打靶的研究
唐冬生1
刘广振1
刘东军2
蒋泓1
龚道元1
马玉珍2
杨东山2
梁浩2
张细权3
1.佛山科学技术学院,医学院,广东,佛山,5280002.内蒙古大学,哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室,内蒙古,呼和浩特,0100213.华南农业大学,动物科学学院,广东,广州,510642
摘要：利用奶牛rDNA基因间的ITS重复序列作为靶位点.对奶牛胎儿成纤维细胞进行多位点基因打靶,建立以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术,并为克隆定点转基因奶牛提供核供体.首先分离培养出奶牛胎儿成纤维细胞,并进行性别鉴定和核型分析.采用MTT比色法确定了G418和GCV正负筛选的最低有效浓度.然后通过多位点基因打靶载体转染、正负筛选获得7个表达绿色荧光的克隆细胞系,经PCR,RT-PCR和测序证实其中1个细胞系为定点整合的克隆细胞系,且GFP基因表达.
关键词：奶牛胎儿成纤维细胞基因打靶多位点定点整合
分类号：S823.91(家畜)
资助基金：国家自然科学基金(30671194)广东省自然科学基金(04011645)广东省科技攻关计划(2006B20101012)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 39-44 )
英文信息