趋化因子CXCL16的原核表达与纯化
林妹晓
江烨梅
陈耀锋
杨画
寻阳
佛山大学医学部,广东 佛山 528225
摘要：为探究跨膜型(TM-)和可溶型(s-)趋化因子CXCL16 的表达及纯化条件,旨在获得高表达量、高纯度的CXCL16 蛋白.通过 PCR 扩增 TM-CXCL16、6×HisTEV-sCXCL16 及 sCXCL16-6×His 基因片段,构建pRSETA0 重组表达质粒并转化至DH5α大肠杆菌表达系统,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达形式,并利用固定化金属离子吸附层析(IMAC)技术对蛋白进行纯化.结果显示,DH5α大肠杆菌成功表达TM-CXCL16 及sCXCL16 蛋白;TM-CXCL16 在 20℃、200 rpm、1.0 mM IPTG条件下表达最优;分别在N端和C端加入His标签的sCXCL16-N和sCXCL16-C在IPTG诱导后呈现表达,His标签位置对sCXCL16 的表达无明显影响;sCXCL16-C蛋白在 20℃下的表达量略优于 37℃.IPTG浓度(0.1～1.0 mM)对sCXCL16-C蛋白的表达量无显著影响;表达形式分析结果显示,sCXCL16-C为不可溶性表达.以上结果表明,TM-CXCL16 及sCXCL16 蛋白均能在原核表达系统中表达,其中sCXCL16 蛋白以不可溶形式存在,经IMAC纯化未能获得高纯度的sCXCL16-C蛋白,后续需进一步优化洗脱条件以提高其纯度.
关键词：趋化因子CXCL16原核表达蛋白纯化
分类号：Q819(生物工程应用)
资助基金：国家自然科学基金(82203213)国家自然科学基金(82203844)广东省医学科学技术研究基金资助项目(A2019396)
论文发表日期：2025-09-30
在线出版日期：2025-10-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 68-75 )
英文信息