慢病毒介导的CRISPR/Cas9靶向ACTB基因sgRNA的设计及活性验证
朱新宇1
何燕华2
李晓娇1
刘子敬2
张晓爱3
罗成龙2
ZOU Xian4
1.仲恺农业工程学院动物科技学院,广东广州 5102252.广东省农业科学院动物科学研究所/猪禽种业全国重点实验室/广东省畜禽育种与营养研究重点实验室,广东广州 5106403.广东省农业科学院农业生物基因研究中心,广东广州 5106404.Institute of Animal Science,Guangdong Academy of Agricultural Sciences/State Key Laboratory of Swine and Poultry Breeding Industry/Guangdong Key Laboratory of Livestock Breeding and Nutrition Research,Guangzhou Guangdong 510640
摘要：该实验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑系统对鸡β-肌动蛋白(β-actin,ACTB)基因外显子2上设计的4条sgRNA进行切割活性验证,为在ACTB基因位点定点敲入外源基因提供工作基础.本实验通过网站设计四条特异性识别ACTB基因的sgRNA序列,构建到带有表达绿色荧光蛋白的慢病毒载体上,在293T细胞上包装慢病毒,然后将慢病毒液感染稳定表达Cas9蛋白的鸡成纤维细胞系(DF-1)验证sgRNA的切割活性.通过细胞荧光表达分析、T7E1内切酶和体外活性检测,鉴定出有切割活性的3条sgRNA,为后续在DF-1细胞上进行功能验证、基因定点敲入奠定了实验基础,同时为后续在鸡这一物种中进行基因编辑提供了研究材料.
关键词：鸡切割活性sgRNAACTB基因
分类号：S813(普通畜牧学)
资助基金：国家自然科学基金(32102539)广东省重点领域研发计划项目(2022B0202110002)广东省农业科学院协同创新中心项目(XT202217)广州市科技计划项目(202201011640)广东省科技创新战略专项(R2020PY-JG008)国家肉鸡产业技术体系项目(CARS-41)
论文发表日期：2024-04-18
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 23-29,36 )
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